[发明专利]检测脐带间充质干细胞影响T淋巴细胞分化的方法

说明书

本发明提供一种检测脐带间充质干细胞影响T淋巴细胞分化的方法，涉及干细胞与再生医学领域。本发明的检测方法，包括分组培养、刺激T淋巴细胞、检测等步骤，根据共培养组和对照组的检测结果判断脐带间充质干细胞对T淋巴细胞分化的影响。本发明的方法能够更精确、全面的检测脐带间充质干细胞对T淋巴细胞分化的影响。

技术领域

本发明涉及干细胞与再生医学领域，特别是涉及一种检测脐带间充质干细胞影响T淋巴细胞分化的方法。

背景技术

脐带间充质干细胞是一种多功能干细胞，免疫调节是评价脐带间充质干细胞功能的重要指标之一。T淋巴细胞是机体免疫系统的重要组成，T淋巴细胞在经抗原刺激等条件激活后，可分化为多种细胞亚群，探究脐带间充质干细胞对T淋巴细胞分化的影响，有助于更好的理解间充质干细胞对机体免疫系统的调节作用，为未来干细胞临床应用提供更加全面的临床前研究证据。现有检测脐带间充质干细胞对淋巴细胞分化的方法不够全面，因而得到的结论也有待商榷。

发明内容

基于此，有必要针对现有的检测方法不够全面的问题，提供一种检测脐带间充质干细胞影响T淋巴细胞分化的方法，能够更加精确、全面的检测脐带间充质干细胞对T淋巴细胞分化的影响。

一种检测脐带间充质干细胞影响T淋巴细胞分化的方法，包括以下步骤：

分组培养：将获取的T淋巴细胞液分为共培养组和对照组，向共培养组中加入CD3抗体、CD28抗体和脐带间充质干细胞，向对照组中加入与共培养组等量的CD3抗体和CD28抗体，将共培养组和对照组放置于相同的条件下培养2～7天；

刺激T淋巴细胞：向共培养的细胞液中加入Cocktail，反应2～4h，收集悬浮细胞；

检测：检测所述悬浮细胞中细胞活化标记CD4、CD8、Foxp3、IFN-r、IL-4、IL-17、IL-21、颗粒酶B的表达丰度；根据共培养组和对照组中细胞活化标记的表达丰度判断脐带间充质干细胞对T淋巴细胞分化的影响。

上述检测方法，将T淋巴细胞和脐带间充质干细胞进行共培养，加入CD3抗体和CD28是为了体外模拟T细胞在体内接受抗原提呈细胞刺激的过程，检测前加入Cocktail可以激活T淋巴细胞，促进T淋巴细胞合成细胞因子，同时抑制高尔基体转运分泌蛋白到细胞外，以便采用流式检测细胞因子的表达情况；检测时采用多种细胞标记CD4、CD8、Foxp3、IFN-r、IL-4、IL-17、IL-21、颗粒酶B等表征相应T淋巴细胞亚群变化，其中CD4⁺Foxp3⁺为Treg细胞，CD4⁺IFN-r⁺为Th1细胞，CD4⁺IL-4⁺为Th2细胞，CD4⁺IL-17⁺为Th17细胞，CD4⁺IL21⁺为Th21细胞，CD8⁺颗粒酶B⁺为杀伤性T细胞，将共培养组和对照组对比，能够精确、全面的检测脐带间充质干细胞对T淋巴细胞分化的影响。

在其中一个实施例中，所述共培养步骤中，所述T淋巴细胞的获取方法包括以下步骤：

稀释：将血液与生理盐水混合得到稀释血液；

离心：将稀释血液加至淋巴细胞分离液中，离心；

分离：离心后，去除上层液体，保留沉淀，加入PBS重悬，离心，舍弃上层液体，保留沉淀，加入1640培养基和5～20％的血清重悬，得到T淋巴细胞液。

在其中一个实施例中，所述稀释步骤中，所述血液与所述生理盐水的体积比为1:(2～3)。优选地，血液与生理盐水的体积比为1:2.5。

在其中一个实施例中，所述离心步骤中，所述淋巴细胞分离液与血液的体积比为(1～2)：1。优选地，淋巴细胞分离液液与血液的体积比为1.5:1。