[发明专利]一种检测喹乙醇的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种检测喹乙醇的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其应用，本发明的试剂盒具有较高的精密度和准确度，而且该试剂盒对喹乙醇有高度的特异性；该试剂盒能够对水、饲料和鱼肉组织中的喹乙醇进行定性和定量检测，样品预处理过程简单，方便快捷，检测准确度高。

技术领域

本发明属于生物技术中的时间分辨荧光免疫分析技术领域，具体涉及一种检测喹乙醇的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其应用。

背景技术

喹乙醇( Olaquindox，OLA )是一种抗菌促生长剂，曾广泛应用于水产养殖，一度被称为“水产瘦肉精”。喹乙醇的毒副作用不容小觑，存在明显的遗传毒性和蓄积毒性，因此国内外相继制定了严格的使用规范和残留限量标准。如美国和欧盟禁止使用喹乙醇，日本规定喹乙醇在动物组织和内脏中的最大残留限量( MRL )为300μg·kg^-1，我国农业部在2001年发布的第168号公告《饲料药物添加剂使用规范》中规定饲料中的添加量不得高于50mg·kg^-1，同时规定禁止在鱼、禽及体重超过35kg猪的养殖过程中使用。尽管如此，抗菌促生长效果好且廉价的喹乙醇目前仍存在违规添加使用的现象。因此，加强喹乙醇的检测监督，特别是加强喹乙醇检测技术的研究极为必要。

喹乙醇的残留检测方法，主要包括传统的仪器分析和免疫分析两大类。其中仪器法主要包括光谱法、色谱法以及液质联用技术等，仪器分析准确度高、精密度强，但其样品前处理过程复杂繁琐、耗时长、需要专业技术人员操作、仪器试剂等价格昂贵，无法在基层得到极大推广。免疫分析技术凭借着其高效、快速、高灵敏度以及高特异性等优势广泛应用于小分子药物残留检测中。

时间分辨荧光免疫分析技术( TRFIA )是近年来发展迅速的一种高灵敏度检测手段。TRFIA的原理是利用具有双功能基团结构的螯合剂，其一端与镧系元素结合，另一端则与抗体(或抗原)上的自由氨基连接，制成镧系元素Eu³⁺标记抗体(或抗原)，它与待测样品中的抗原(或抗体)结合生成抗原抗体复合物。此时免疫复合物的荧光强度非常弱，需加入一种增强液，使Eu³⁺从复合物中解离下来，在增强液中TOPO、Triton X-100等的协同作用下可与另一种螯合剂TTA形成新的复合物，该复合物可发射出很强的荧光，使荧光效果增强上百万倍。最后用时间分辨仪测定其荧光强度cps，即可确定样品中抗原的含量。因此，研究一种配置简单、性状稳定、成本低廉、效果明显的喹乙醇TRFIA检测试剂盒是非常必要和有意义的。

发明内容

为了解决上述存在的问题，本发明提供了一种检测喹乙醇的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种检测喹乙醇的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，包括以下组成：

（1）包被有1 μg·mL^-1抗原OLA-A-OVA的反应板；-A-表示-CH=CH-CH=CH-COO-；

抗原OLA-A-OVA为：，

（2）铕标记的喹乙醇单克隆抗体溶液：含0.5 ng·mL^-1的Eu³⁺-OLA-mAb，质量百分含量为1%BSA，质量百分含量为0.2%叠氮化钠，基础缓冲体系为0.01 mol·L^-1，pH=7.4的磷酸盐缓冲液与等体积的甘油混合而成；

（3）喹乙醇标准品母液1 μg·mL^-1；

（4）反应增强液：含0.27 mmol·L^-1а-噻吩甲酰三氟丙酮，0.5 mmol·L^-1三辛基氧化膦，体积分数为0.05%无水乙醇，体积分数为5.9%冰乙酸，体积分数为0.25%的TritonX-100，6.8 mmol·L^-1的邻苯二甲酸氢钾，pH为3 .0，余量为去离子水；