[发明专利]一种喹乙醇的磁免疫化学发光检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种喹乙醇的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括反应板，喹乙醇磁标抗体，喹乙醇酶标半抗原，磁标抗体稀释液，酶标半抗原稀释液，喹乙醇标准品母液，化学发光底物A液，化学发光底物B液，浓缩洗涤液；

所述酶标半抗原是辣根过氧化物酶标记的喹乙醇半抗原；所述喹乙醇磁标抗体是磁珠标记的喹乙醇单克隆抗体；

所述喹乙醇单克隆抗体是由喹乙醇半抗原与牛血清白蛋白偶联后制备得到人工抗原，然后免疫小鼠后通过细胞融合、筛选、抗体的制备、纯化获得的；

喹乙醇半抗原由以下步骤制备得到：

(1.1)将1mmol喹乙醇溶于2-5mLTHF中，0℃下加入1.0-1.2mmol NaH，搅拌0.5-2小时，后加入1mmol的5-溴-2,4-二烯戊酸乙酯，65℃下反应6-8小时，待反应完全后，加入30-50mLH₂O，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，旋干溶剂，经柱层析分离得到OLA-A₁，A₁为-CH＝CH-CH＝CH-COOCH₂CH₃；

(1.2)将1mmol OLA-A₁溶于8-12mL甲醇与水的混合液中，其中，甲醇与水的体积均为5mL)，加入氢氧化锂1-1.5mmol，搅拌，室温下反应1-3h；反应完全后，用1mol/L的盐酸溶液调节pH等于5-6，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥，旋蒸除去溶剂，得产物OLA-A，-A为-CH＝CH-CH＝CH-COOH；具体的合成路线如下：

(2)喹乙醇人工抗原的合成，包括以下步骤：

取0.04mmol OLA-A溶于0.8-1.0mL DMF中，加入0.04mmol N-羟基琥珀酰亚胺和0.04mmol二环己基碳二亚胺，室温下避光搅拌反应10-12h后2000r/min离心10min，离心后上清液为a液；

称取20mg OVA(或BSA)溶于5mL 0.01mmol/L，pH＝7.4的磷酸盐缓冲液中，此为b液；

4℃下将0.6mLa液逐滴加入到b液中，4℃搅拌反应过夜；次日转入透析袋内，0.01mmol/L，pH＝7.4的磷酸盐缓冲液透析2天，离心弃沉淀，得到交联产物，命名为OLA-A-OVA或OLA-A-BSA，-A-表示-CH＝CH-CH＝CH-COO-；具体的合成路线如下：

2.根据权利要求1所述的一种喹乙醇的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述反应板是96孔反应板，其材质是石英材质或者玻璃材质。

3.根据权利要求1所述的一种喹乙醇的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，磁珠粒径为2.8μm，磁珠末端具有-OH或-COOH或-NH₂基团。

4.根据权利要求1所述的一种喹乙醇的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物A液为1mmol·L^-1鲁米洛与2mmol·L^-1四溴苯酚等比例混合，其中，0.02mol·L^-1，pH为8.5的Tris-HCl为缓冲液；

化学发光底物B液为用0.02mol·L^-1，pH为8.5的Tris-HCl为稀释液，将质量分数为30％双氧水溶液稀释500倍。