[发明专利]一种同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶和α-淀粉酶的方法

权利要求书

1.一种同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶三种蛋白的方法，其特征在于，所述方法为采用硫酸铵盐析以及Q Beads 6 FF阴离子层析进行三种蛋白的纯化，所述方法具体步骤如下： (1)通过硫酸铵盐析的方法确定三种蛋白析出时所对应的硫酸铵饱和度； (2)将5-10倍柱体积盐析后的酶液上样于Q柱，流速为1-5mL/min，上样前酶液需经0 .45 μm滤头过滤除杂； (3)配制50-400mM的NaCl溶液，按照5-10倍柱体积梯度洗脱Q柱，收集各梯度的洗脱液， 浓缩后进行酶活与蛋白测定； (4)将浓缩液进行SDS-PAGE电泳，观察蛋白纯化后的效果。

2.根据权利要求1所述的同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶三种蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)所述的硫酸铵盐析方法具体为，分别将三种酶粉与各自的缓冲液按照1:10的比例进行稀释，混匀后8 ,000rpm离心5min，在上清液中加入硫酸铵粉末使硫酸铵饱和度达到40％，静置30min后，8 ,000rpm再次离心5min，在上清液中再次加入硫酸铵粉末使硫酸铵饱和度达到50％，静置，再次离心后，上清液补充硫酸铵至60％饱和度，梯度盐析直至硫酸铵饱和度为90％，最后收集各梯度的上清和沉淀放入透析袋中除盐。

3.根据权利要求2所述的同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶三种蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中纯化脂肪酶的缓冲液为pH 7 .5的磷酸盐缓冲液，纯化酸性蛋白酶以及 α-淀粉酶的缓冲液为pH 7 .6的Tris-HCl。

4.根据权利要求2所述的同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶三种蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中除盐的方法为将沉淀再次溶解于相应的缓冲液中放入截留分子量为3kDa的透析袋，两端夹紧后放入缓冲液中4℃透析12h除盐。

5.根据权利要求1所述的同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶三种蛋白的方法，其特征在于，步骤(3)中收集的洗脱液需用浓缩管离心进行浓缩，浓缩管浓缩5倍体积量。