[发明专利]GLTSCR1前列腺癌预后检测试剂及其试剂盒

权利要求书

1.一种GLTSCR1前列腺癌预后检测试剂，其试剂组成如下(20人份)：

。

2.如权利要求1所述的GLTSCR1前列腺癌预后检测试剂盒，包含检测GLTSCR1检测试剂。

3.如权利要求2所述的GLTSCR1前列腺癌预后检测试剂的使用方法,包括步骤如下：

(1) 将经拷片脱蜡、水化和抗原修复后的切片置于孵育盒中，用阻水笔把组织圈住，以免滴加后的试剂扩散，吸水纸将切片上的水稍吸去，不要碰到组织，加H₂O₂ 50μl覆盖组织后室温孵育30min，以阻断内源性过氧化物酶的活性；

(2) PBS 冲洗3min，重复3次；

(3) 吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加50μl非免疫羊血清工作液，室温下孵育15分钟；

(4) 轻轻甩去血清，不漂洗，滴加兔源抗GLTSCR1多克隆抗体:PBS =1:100的一抗稀释液50μl，室温下孵育60 分钟或4℃过夜；

(5) PBS 冲洗5min，重复3次；

(6) 吸水纸将切片上的PBS液稍吸去，滴加50μl二抗：生物素标记的羊抗兔的IgG工作液，室温下孵育20 分钟；

(7) PBS 冲洗5min，重复3次；

(8) 吸水纸将切片上的PBS 液稍吸去，每张切片滴加50μl链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温下孵育15 分钟；

(9) PBS冲洗3min，重复 3 次；

(10) 吸水纸将切片上的PBS 液稍吸去，滴加100μl新鲜配制的DAB 显色剂显色，自来水充分冲洗，复染，脱水透明，封片；

(11)免疫组织化学检测结果判断结果判定标准：Leica荧光显微镜下，每张切片随机选取五个高倍镜视野观察细胞，细胞质和/或细胞核出现棕黄或棕褐色颗粒为阳性细胞，根据阳性细胞染色强度以及阳性细胞在总细胞中所占数量比例判定实验结果；

按染色强度评分：无色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分；然后按阳性细胞率评分：肿瘤细胞内无阳性染色者为0 分，阳性细胞率≤10％为1 分，11％-50％为2分，51％-75％为3 分，＞75％为4 分. 两者积分的乘积作为染色结果的评判标准：0 定为-，阴性；1～4 分为+，弱阳性；5～8 分为++，阳性；9～12 分为+++，强阳性。

4.如权利要求3所述的GLTSCR1前列腺癌预后检测试剂的使用方法,其中：步骤(10)的DAB 显色剂配制方法为20×DAB 缓冲液、20×DAB 底物、20×DAB 色原各50μl滴加至850μl双蒸水中配制成1ml新鲜显色液，有效使用时间为30min。