[发明专利]一种乳铁蛋白含量的凝胶电泳检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种乳铁蛋白含量的凝胶电泳检测方法，其特征在于：该检测方法包括以下步骤：

采用能够结合牛乳铁蛋白的DNA作为探针分子，利用通过结合形成的探针分子-牛乳铁蛋白复合物与未结合牛乳铁蛋白的探针分子在核酸凝胶电泳中的迁移率不同，得到与样品中的牛乳铁蛋白对应的电泳条带，核酸凝胶电泳采用浓度为0.5％～4％的琼脂糖凝胶；

所述DNA选自寡聚核苷酸5`-TAGAGGATCAAA-3`、5`-GGCACTTGC-3`、5`-GGCACTTAC-3`、5`-TCCATGACGTTCCTCTCCATGACGTTCCTCTCCATGACGTTCTTCCTC-3`，以及变性后形成的小牛胸腺DNA单链中的一种或多种；

所述样品由待测乳品、含牛乳铁蛋白的食品或保健品混匀与所述DNA的单链构象制成。

2.根据权利要求1所述一种乳铁蛋白含量的凝胶电泳检测方法，其特征在于：所述检测方法还包括以下步骤：根据不同浓度牛乳铁蛋白与探针分子结合所形成的复合物在电泳条带灰度值上的差异性，对所述样品中的牛乳铁蛋白进行定量。

3.根据权利要求2所述一种乳铁蛋白含量的凝胶电泳检测方法，其特征在于：所述检测方法具体包括以下步骤：

1)DNA的前处理：将能够结合牛乳铁蛋白的DNA进行变性和退火，得到具有一定构象的单链DNA；

2)样品制备：将步骤1)处理得到的单链DNA与待测乳品、含牛乳铁蛋白的食品或保健品混匀，然后于20～50℃下孵育30～60min，得到样品；

3)电泳：用核酸凝胶电泳对步骤2)制备的样品进行分析，得到电泳图谱；

4)定量：对牛乳铁蛋白与所述单链DNA结合所形成的复合物在电泳图谱中对应的条带进行灰度分析，然后利用绘制的牛乳铁蛋白浓度-灰度值标准曲线计算样品中的牛乳铁蛋白的含量。

4.根据权利要求3所述一种乳铁蛋白含量的凝胶电泳检测方法，其特征在于：所述前处理的条件为：置于90～100℃下3～7min，然后冷却至4～25℃。

5.根据权利要求3所述一种乳铁蛋白含量的凝胶电泳检测方法，其特征在于：所述乳品选自生乳、奶粉或液态乳制品。

6.根据权利要求3所述一种乳铁蛋白含量的凝胶电泳检测方法，其特征在于：所述DNA在所述步骤1)之前，预先进行荧光标记。

7.根据权利要求3所述一种乳铁蛋白含量的凝胶电泳检测方法，其特征在于：分别将1、2、3、4及5μL的70～130μg/mL牛乳铁蛋白标准品与3～7μL按照步骤1)处理得到的0.5～1.5μM单链DNA混合，并定容至7.5～18μL，然后通过孵育得到对应样品；根据不同样品中牛乳铁蛋白标准品与所述单链DNA结合形成的复合物在电泳图谱中对应的条带灰度值，绘制牛乳铁蛋白浓度-灰度值标准曲线。

8.一种乳品、含牛乳铁蛋白的食品或保健品中乳铁蛋白含量的凝胶电泳检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括核酸凝胶电泳试剂、能够结合牛乳铁蛋白的DNA以及牛乳铁蛋白标准品，核酸凝胶电泳采用浓度为0.5％～4％的琼脂糖凝胶；

所述DNA选自寡聚核苷酸5`-TAGAGGATCAAA-3`、5`-GGCACTTGC-3`、5`-GGCACTTAC-3`、5`-TCCATGACGTTCCTCTCCATGACGTTCCTCTCCATGACGTTCTTCCTC-3`，以及变性后形成的小牛胸腺DNA单链中的一种或多种。

9.根据权利要求8所述一种乳铁蛋白含量的凝胶电泳检测试剂盒，其特征在于：所述DNA具有荧光标记。