[发明专利]一种遗传性耳聋基因的检测方法

说明书

本发明公开了一种遗传性耳聋基因的检测方法，属于基因检测的技术领域。其技术方案要点是，PCR扩增反应条件为：35‑37℃保温3‑5min，94‑95℃预变性3‑5min，95‑96℃变性30‑32s，55‑58℃退火30‑32s，68‑72℃延伸42‑46s，35‑38次循环，60‑65℃延伸8‑12min，该检测方法通过改变扩增反应的条件，减少基因芯片假阳性的结果，提高PCR产物的特异性程度，降低后期PCR扩增产物与探针杂交过程中假阳性出现的概率，提高基因芯片检测耳聋突变基因的准确性和灵敏性。

技术领域

本发明涉及基因检测的技术领域，特别涉及一种遗传性耳聋基因的检测方法。

背景技术

耳聋是中国第一大残疾，其中遗传因素所致的耳聋约占60％。遗传性耳聋主要是指基因异常所致的耳聋，是人类最常见的感觉神经系统缺陷。这种疾病通过常染色体隐性，常染色体显性，X-连锁遗传和线粒体遗传方式遗传给下一代。国内耳聋分子流行病学研究表明，大部分非综合征型耳聋由以下4个基因突变引起：GJB2(35delG、176dell6、235delC及299del AT)、GJB3(538C>T)、SLC26A4(IVS7—2A>G、2168A>G)和线粒体DNA12SrRNA(1555A>G、C1494C>T)。

随着分子遗传学技术的快速发展和基因芯片技术的广泛应用，耳聋芯片成为NSHL基因诊断的主要检测方法。通过对基因的识别可以预防先天性耳聋出生缺陷，控制药物致聋风险，预防或者延缓耳聋的发生发展。但目前运用基因芯片技术对耳聋基因进行检测时，PCR扩增过程中往往容易出现非特异性扩增，引起检测结果的假阳性，容易对后期的基因芯片杂交过程产生影响，影响了该检测技术的检测准确性。

发明内容

针对现有技术不足，本发明的目的在于：提供一种遗传性耳聋基因的检测方法，以达到提高基因芯片检测耳聋突变基因的准确性和灵敏性的效果。

本发明的目的是通过以下技术方案得以实现的：一种遗传性耳聋基因的检测方法，包括以下步骤：

(a)提取待测样本基因组DNA；

(b)PCR扩增杂交产物：扩增反应条件为：35-37℃保温3-5min，94-95℃预变性3-5min，95-96℃变性30-32s，55-58℃退火30-32s，68-72℃延伸42-46s，35-38次循环，60-65℃延伸8-12min；

(c)PCR产物与基因芯片杂交：制备磁珠、磁珠纯化、磁珠富集PCR产物、PCR产物变性、制备杂交反应混合物、芯片杂交；

(d)基因芯片的洗涤与干燥；

(e)基因芯片的结果分析；

所述基因芯片含有遗传性耳聋突变基因的特异性探针。

将人类的待测样本(如血液、血清或组织等)采用本领域通用的DNA提取方法提取基因组DNA，然后将待测样本提取的基因组DNA作为模板进行PCR扩增，扩增得到的PCR产物经过磁珠吸附纯化后进行基因芯片杂交，以检测待测样本的DNA基因组中是否有突变的耳聋基因与探针结合，以此来确定被检侧的人体是否有耳聋的风险。

通过采用上述方案，通过改变扩增反应的条件，先将待扩增的混合物保温一定的时间，使PCR扩增体系在适宜的温度稳定一段时间，使其中的DNA聚合酶在适宜的温度下激发活性，以便于后期扩增期间保持较高的活性，提高PCR扩增的效率。而且优化扩增中预变性和变性的温度和时间，可以明显地减少假阳性的结果；优化退火和延伸的时间和温度，使PCR的非特异性扩增降低，提高引物与模板的结合效率，提高PCR扩增的效率，提高PCR产物的特异性程度，降低后期PCR扩增产物与探针杂交过程中假阳性出现的概率，提高基因芯片检测耳聋突变基因的准确性和灵敏性。