[发明专利]一种遗传性耳聋基因的检测方法

权利要求书

1.一种遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

（a）提取待测样本的基因组DNA；

（b）PCR扩增杂交产物：扩增反应条件为：35-37℃保温3-5min，94-95℃预变性3-5min，95-96℃变性30-32s，55-58℃退火30-32s，68-72℃延伸42-46s，35-38次循环，60-65℃延伸8-12min；

（c）PCR产物与基因芯片杂交：制备磁珠、磁珠纯化、磁珠富集PCR产物、PCR产物变性、制备杂交反应混合物、基因芯片杂交；

（d）基因芯片的洗涤与干燥；

（e）基因芯片的结果分析；

所述基因芯片含有遗传性耳聋突变基因的特异性探针。

2.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述步骤（b）中，变性到退火之间的降温速率为0.4-0.8℃/s，退火到延伸之间的升温速率为0.2-0.6℃/s。

3.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述步骤（b）中，PCR扩增体系包括：5×Buffer为5.0μl，上游引物为1.0μl，下游引物为2.0μl，dNTP为2.0μl，模板DNA为1.0μl，Prime STAR为0.3μl，ddH₂O为13.7μl，总体积为25μl。

4.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述步骤（c）中，磁珠富集PCR产物的步骤包括：

（i）将纯化后的磁珠与PCR产物吹吸5-10次混匀，静置5-8min，得到PCR产物-磁珠混合物；

（ii）将产物-磁珠混合物用磁力吸附至溶液澄清，弃去溶液。

5.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述步骤（c）中，基因芯片杂交的温度为45-55℃，时间为50-70min。

6.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述步骤（d）中，基因芯片洗涤采用洗涤液进行洗涤；洗涤液包括洗涤液I和洗涤液II；

洗涤液I，按体积百分比包括以下组分：ddH₂O 96-98%，20×SSC 1.2-2%，10%SDS 0.8-2%；洗涤液II，按体积百分比包括以下组分：ddH₂O 99-99.9%，20×SSC按照0.2-0.5%。

7.根据权利要求6所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述步骤（d）中，基因芯片洗涤的洗涤程序包括以下步骤：

（i）洗涤液I的洗涤条件：温度35-38℃，时间130-140s；

（i）洗涤液II的洗涤条件：温度35-38℃，时间100-110s。

8.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述基因芯片至少包含一个阳性对照和一个阴性对照。

9.根据权利要求1所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述阳性对照为多聚PolyT，阴性对照为ddH₂O。

10.根据权利要求3所述的遗传性耳聋基因的检测方法，其特征在于：所述PCR扩增体系中，上游引物和下游引物的浓度均为0.1-0.5μM。