[发明专利]一种利用新型dCas9调控基因表达的方法

权利要求书

1.一种利用新型dCas9系统调控基因表达的方法，其是通过生物对密码子的偏好性，胞内翻译过程中个别密码子利用频率和其对应的tRNA在宿主胞内浓度较低，实现在翻译水平上更加精准地调节基因的表达。

2.根据权利要求所述一种利用新型dCas9系统调控基因表达的方法，其特征在于采用如下步骤：

A.需要确定所用菌株和其密码子偏好性；

B.根据氨基酸密码子偏好性和dCas9基因序列，确定选用的氨基酸和其稀有密码子，将所需调控基因中的相应氨基酸的密码子替换为对应的稀有密码子，使用PCR方法重新人工合成此序列；

C.将步骤2中人工合成的基因序列与质粒载体1连接，将连接产物化转至感受态细胞中，经过PCR验证，挑选正确的单菌落，保存菌液，提取质粒1；

D.设计靶向所需调控基因的sgRNA，利用PCR将sgRNA表达框连接到载体2上，将连接产物化转至感受态细胞中，经过PCR验证，挑选正确的单菌落，保存菌液，提取质粒2；

E.将3、4中提取的两质粒转化到同一感受态细胞中，涂平板，挑取单菌落接入培养基中培养，补加相应氨基酸，检测调控基因的表达。

3.如权利要求1或2所述的一种利用新型dCas9系统调控基因表达的方法，其特征在于步骤(A)中，所述稀有密码子为相对于菌株、可以将氨基酸插入到肽链中的任何密码子，可筛选范围适用于但不限于微生物。

4.如权利要求1或2所述的一种利用新型dCas9系统调控基因表达的方法，其特征在于步骤(B)中，所述使用的稀有密码子包括在特定物种中的所有稀有密码子。

5.如权利要求1或2所述的一种利用新型dCas9系统调控基因表达的方法，其特征在于步骤(E)中，加入的氨基酸为特定微生物中具有稀有密码子形式的某氨基酸。