[发明专利]一种制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法

权利要求书

1.一种制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法，其特征在于，所述制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法包括如下步骤：

(1)将FeCl₃、K₃[Fe(CN)₆]溶于50mL含有HCl与KCl的溶液中；

(2)步骤(1)获得的溶液通氩气8～12min；

(3)直径为2mm的裸玻碳电极经氧化铝粉末打磨抛光处理，所述氧化铝粉末的直径包括0.3μm和0.05μm，得到镜面的玻碳电极；

(4)+400mV条件下，将步骤(3)获得的电极置于步骤(2)获得的溶液中的时间为35～45s；

(5)以含有HCl与KCl的溶液为电解液，将步骤(4)获得的电极进行活化；

(6)将步骤(5)获得的电极在100～110℃干燥55～65min并冷却至室温；

(7)将谷氨酸氧化酶与戊二醛溶液混合得到混合液，所述戊二醛溶液的质量分数为0.1～0.15％，所述谷氨酸氧化酶的含量为0.08～0.12U，所述混合液的体积为5μL，将混合液滴定于步骤(6)获得的电极上。

2.根据权利要求1所述制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法，其特征在于，所述步骤(1)中FeCl₃的含量为1.8～2.3mmol；所述K₃[Fe(CN) ₆]的含量为1.8～2.3mmol；所述HCl的含量为0.08～0.12mol；所述KCl的含量为0.08～0.12mol。

3.根据权利要求1所述制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法，其特征在于，所述步骤(5)中HCl与KCl的浓度均为0.08～0.12mol/L；扫描速率为50mV/s；电压为50mV～350mV；扫描次数为18～23次。

4.根据权利要求1～3任一项所述制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法，其特征在于，所述步骤(7)中谷氨酸氧化酶的制备方法包括下面步骤：

(1)谷氨酸氧化酶基因序列合成并构建至质粒上，得到重组质粒；

(2)将质粒与大肠感受态混匀，在冰上静置30min后42℃热激90s，再次冰上放置2min后加入到LB液体培养基中培养，之后将培养后的菌液涂布于LB平板上过夜培养，从而得到谷氨酸氧化酶生产菌；

(3)将谷氨酸氧化酶生产菌接种于LB液体培养基中，培养过夜；培养液转接入LB液体培养基中发酵培养，再加入乳糖或异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达，离心收集菌体；

(4)用PBS缓冲液洗涤步骤(3)得到的菌体，离心，超声破碎，收集上清液，即为谷氨酸氧化酶的粗酶液，纯化粗酶液获取谷氨酸氧化酶。

5.根据权利要求4所述制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法，其特征在于，所述质粒为pET-28a；所述大肠感受态为大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)。

6.根据权利要求4所述制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法，其特征在于，所述粗酶液的纯化方法包括：将粗酶液置于镍柱中，通过50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L以及250mmol/L的咪唑溶液梯度洗脱，之后通过超滤管离心富集，得到纯化后的谷氨酸氧化酶酶液。

7.一种根据权利要求1～6任一项所述制备具有宽检测线性范围谷氨酸传感电极的方法制备得到的谷氨酸传感电极。