[发明专利]一种快速检测总Tau蛋白的免疫层析检测卡及其制备方法

权利要求书

1.一种快速检测总Tau蛋白的免疫层析检测卡，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，其特征在于，所述检测线上包被有一株鼠抗人总Tau蛋白单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。

2.如权利要求1所述的快速检测总Tau蛋白的免疫层析检测卡，其特征在于，所述试纸条还包括PVC板，所述PVC板上固定有依次连接的样品垫、标记物垫、包被垫及吸水垫，所述包被垫上依次设有检测线及质控线，所述样品垫和标记物垫连接为一体。

3.如权利要求2所述的快速检测总Tau蛋白的免疫层析检测卡，其特征在于，所述包被垫靠近检测线的一端连接有标记物垫，靠近质控线的一端连接有吸水垫。

4.如权利要求3所述的快速检测总Tau蛋白的免疫层析检测卡，其特征在于，所述标记物垫上包被有另一株鼠抗人总Tau蛋白单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球，所述另一株鼠抗人总Tau蛋白单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球的摩尔比为1:0.2～4。

5.如权利要求4所述的快速检测总Tau蛋白的免疫层析检测卡，其特征在于，所述快速检测AD7c-NTP的免疫层析检测卡还包括用于卡设试纸条的卡壳。

6.如权利要求5所述的快速检测总Tau蛋白的免疫层析检测卡，其特征在于，所述卡壳包括：

底槽，其连接于所述PVC板；

上盖，其连接于所述底槽，所述上盖上设置有用于向所述样品垫上加样的加样孔；

观察窗，其设置于上盖上并用于检测线和质控线的数据采集。

7.一种权利要求1-6任一项所述的快速检测总Tau蛋白的免疫层析检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)包被垫的制备：将一株鼠抗人总Tau蛋白单克隆抗体和羊抗兔多克隆抗体分别包被到硝酸纤维素膜上，干燥备用；

2)标记物垫的制备：将另一株鼠抗人总Tau蛋白单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球混合后，喷涂在玻璃纤维素膜上，干燥备用；

3)组装试纸条：在PVC板上粘接包被垫，并在靠近该包被垫上的质控线的一端搭接吸水垫，在靠近该包被垫上的检测线的一端搭接标记物垫及其连接的样品垫；然后将其切成所需宽度的试纸条，之后将该试剂条放入卡壳。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述表面活化的荧光乳胶微球通过以下步骤制得：

1)取表面活性剂加入0.1～0.5mol/L，pH值为8～10的硼酸-硼砂缓冲溶液中，再加入二甲基甲酰胺、N,N’-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌反应；所述硼酸-硼砂缓冲溶液包含0.5wt％～3wt％的PEG2000；

2)取表面带有羧基的荧光乳胶微球的分散液，以碱性硼酸盐缓冲溶液调pH值至8～10后，加入到步骤1)所得的产物中，在25℃下搅拌反应1～5h，反应完毕后，离心去除上清液，得到表面活化的荧光乳胶微球，用碱性硼酸盐缓冲溶液复溶备用；所述碱性硼酸盐缓冲溶液包含0.5wt％～3wt％的PEG2000。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂包含有N，N'-双月桂酰基乙二胺二丙烯酸钠、聚乙二醇单月硅酸酯、十二烷基苯磺酸盐和月桂酰谷氨酸盐，四者的重量比为(0.5～6):(4～9):(0.8～3):(5～14)；所述表面活性剂与所述氨基表面的荧光乳胶微球的重量比为(0.5～120):1。

10.如权利要求8或9所述的制备方法，其特征在于，所述另一株鼠抗人总Tau蛋白单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球通过以下步骤制得：

取表面活化的荧光乳胶微球加入碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺中室温搅拌2～6h，然后加入另一株鼠抗人总Tau蛋白单克隆抗体，室温下搅拌1～4h，再加入10～50mg BSA封闭液，继续搅拌1～4h；在2～8℃下，按照11000r/min的转速离心30min，除去上清液；最后，用0.01M～0.5M，pH＝7.4的磷酸缓冲溶液将固体沉淀物复溶，再加入Proclin300在4℃下保存待用；

其中，所述表面活化的荧光乳胶微球与另一株鼠抗人总Tau蛋白单克隆抗体的质量比例为1：(0.01～4)。