[发明专利]一种抗体融合蛋白及其制法和在抗肿瘤中的应用

说明书

本发明属于肿瘤治疗领域，公开了一种抗体融合蛋白及其制法和在抗肿瘤中的应用。更具体地，其包含抗HER2单克隆抗体IgG和VEGFR1的D2结构域，VEGFR1的D2结构域通过肽接头L连接至IgG重链的C末端。该抗体融合蛋白能同时阻断HER2和VEGFR2信号通路，具有优于单克隆抗体的抑制肿瘤增殖的作用，为抗肿瘤治疗提供了一种治疗效果更佳的候选药物，在肿瘤疾病的治疗上具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤治疗和生物技术领域，涉及一种抗HER2单克隆抗体IgG和VEGFR1的D2结构域组成的抗体融合蛋白及其制备方法和用途。

背景技术

HER2(human epidermal growth factor receptor 2)，具有受体酪氨酸蛋白激酶活性，是人表皮生长因子受体家族成员之一，只在成年人的少数正常组织中呈低水平表达。研究表明，HER2在多种肿瘤中过表达，如在约30％的乳腺癌患者和16％的胃癌患者中均存在过度表达情况，HER2在肿瘤中的过表达可以显著促进肿瘤的生长，并增强肿瘤的侵袭和转移能力，是这类患者预后较差的重要指征。因此，早在1998年，第一个靶向于HER2的单克隆抗体药物Herceptin被FDA批准上市，并用于HER2过表达的乳腺癌和胃癌的治疗。

肿瘤的生长有两个阶段，从无血管的缓慢生长期到有血管的快速增殖期。如果肿瘤内部没有血管的生成，则原发肿瘤生长缓慢，转移无法实现。因此抑制肿瘤血管生成被认为是当前具有前途的肿瘤治疗方法之一。血管内皮生长因子(VEGFs)家族中，VEGF-A165(以下简称VEGF)是最丰富活跃的亚型。VEGF通过与II型受体VEGFR2结合，激活信号通路发生一系列级联反应，促进新生血管形成并维持其完整性。但I型受体VEGFR1与VEGF结合的能力远大于VEGFR2，发生作用部位主要是VEGFR1的胞外区D2结构域。VEGFR1-D2通过竞争结合VEGF，阻断VEGFR2与VEGF结合，从而阻断信号通路，抑制内皮细胞增殖与血管生成，从而抑制肿瘤的快速增殖与转移。

本发明介绍了一种能同时阻断HER2和VEGFR2信号通路的抗体融合蛋白，我们的研究表明，该抗体融合蛋白一方面可以结合肿瘤细胞表面HER2抗原，抑制肿瘤增殖；另一方面，可以竞争结合VEGF，抑制内皮细胞增殖与血管生成。这个作用机制发生在肿瘤微环境中，可以有效地抑制肿瘤内部血管的生成，从而抑制肿瘤生长。该抗体融合蛋白具有优于HER2单抗及HER2单抗+FcD2的抑制肿瘤增殖的作用，在肿瘤疾病的治疗上具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能同时阻断HER2和VEGFR2信号通路的抗体融合蛋白，提供编码所述抗体融合蛋白的核苷酸分子；提供包含所述核苷酸分子的表达载体；提供所述表达载体的宿主细胞；提供所述抗体融合蛋白的制备方法；提供包含所述抗体融合蛋白的药物组合物；提供所述抗体融合蛋白在制备药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明提供了一种能同时阻断HER2和VEGFR2信号通路的抗体融合蛋白，其包含抗HER2单克隆抗体IgG和VEGFR1的D2结构域，VEGFR1的D2结构域通过肽接头L连接至IgG重链的C末端。

本发明“抗体融合蛋白”是重组产生的抗原结合分子，其中抗体或抗体片段连接至另一种蛋白质或肽。其包含抗HER2单克隆抗体IgG和VEGFR1的D2结构域，VEGFR1的D2结构域通过肽接头L连接至IgG重链的C末端。

本发明“抗HER2单克隆抗体IgG”是约150kDa的分子，它由四条肽链构成，含有两条相同的约50kDa的γ重链，和两条相同的约25kDa的轻链，从而具有四聚体四级结构。两条重链通过二硫键相互连接，并各自与一条轻链连接。所成的四聚体具有相同的两半，二者形成叉型或者类似Y的形状，叉的每一端含有一个相同的抗原结合位点。IgG抗体可以基于重链的恒定区中氨基酸序列的微小差异而分为多个亚类(例如IgG1、2、3、4)。