[发明专利]一种IV型胶原蛋白检测试剂盒的检测方法

说明书

本发明揭示一种IV型胶原蛋白检测试剂盒的检测方法，将试剂盒打开，取出试剂盒内部的酶标板、说明书和分别呈装有R1试剂与R2试剂的试剂管，并与试剂盒内说明书核对试剂管的数量与名称是否正确，通过滴管取用血清样品与试剂R1加入酶标板上的酶标板条中混匀，随后将酶标板放入温箱中孕育一段时间后取出酶标板，取用混有包被鼠抗人IV型胶原蛋白单克隆抗体胶乳颗粒的试剂R2通过滴管注入至酶标板中的样品中并混匀；本发明在需要检测血清样品中的IV型胶原蛋白含量时，试剂R2为包被鼠抗人IV型胶原蛋白单克隆抗体的胶乳颗粒，在反应过程中不会出现交叉反应，且pH值不会出现较大的变化，达到了使得测试结果更为准确的效果。

技术领域

本发明涉及IV型胶原蛋白检测技术领域，具体涉及一种IV型胶原蛋白检测试剂盒的检测方法。

背景技术

Ⅳ型胶原蛋白是构成基底膜重要成份，Ⅳ型胶原蛋白在基底膜中的含量能够反映基底膜胶原的更新率，其浓度与肝纤维化程度相关，含量增高可较灵敏反映出肝纤维化过程，是肝纤的早期标志之一。

现有的Ⅳ型胶原蛋白在检测时大多通过放射免疫分析法来检测时血清中的Ⅳ型胶原蛋白含量，但在检测过程中有时会出现交叉反应和pH有时会影响结果等问题，从而对测试结果造成一定的影响。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供IV型胶原蛋白检测试剂盒的检测方法，具有避免出现交叉反应和未完全灭活降解酶和盐及pH有时会影响结果的优点，解决了现有的检测方式有时会出现交叉反应，不能灭活降解酶和盐，pH有时会影响结果等问题。

本发明提供如下技术方案：IV型胶原蛋白检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：

S1、将试剂盒打开，取出试剂盒内部的酶标板、说明书和分别呈装有R1试剂与R2试剂的试剂管，并与试剂盒内说明书核对试剂管的数量与名称是否正确；

S2、通过滴管取用血清样品与试剂R1加入酶标板上的酶标板条中混匀；

S3、随后将酶标板放入温箱中孕育一段时间后取出酶标板；

S4、取用混有包被鼠抗人IV型胶原蛋白单克隆抗体胶乳颗粒的试剂R2通过滴管注入至酶标板中的样品中并混匀；

S5、将酶标板继续放入温箱中孕育后取出，调节全自动生化分析仪至测定波长并测量此时酶标板内的样品，记录此时的吸光度为A1；

S6、将酶标板放入温箱中孕育一端时间后取出，使用全自动生化分析仪测量此时酶标板中的样品，记录此时吸光度为A2。

S7、通过ΔA=A2-A1的公式得出ΔA的数值，随后根据ΔA在全自动生化分析仪中建立的校准曲线上的位置，即可求得相应的IV型胶原蛋白在血清样品中的浓度。

作为对前述技术方案的再进一步设计：步骤S2中血清样品的剂量为20μl，试剂R1的剂量为180μl，步骤S4中的试剂R2的计量为60μl。

作为对前述技术方案的再进一步设计：步骤S3与步骤S5中酶标板在温箱中孕育的温度均为37℃，且步骤S3中酶标板在温箱中孕育的时间控制在3~5分钟内。

作为对前述技术方案的再进一步设计：步骤S6中酶标板在温箱中孕育的时间为4分30秒。

作为对前述技术方案的再进一步设计：步骤S5中自动生化分析仪调节的主波波长为600nm，副波波长为700nm，此时反应温度为37℃。

作为对前述技术方案的再进一步设计：步骤S1中试剂R1为浓度20mmol/L、PH值7.4的磷酸盐缓冲液，试剂R2为试剂R1与包被鼠抗人IV型胶原蛋白单克隆抗体的胶乳颗粒的混合物，且包被鼠抗人IV型胶原蛋白单克隆抗体的胶乳颗粒在试剂R2中的浓度为0.6%。