[发明专利]增强核酸扩增反应的增强剂、试剂盒和进行核酸扩增反应的方法

权利要求书

1.一种增强核酸扩增反应的增强剂，其特征在于，其适用于含有荧光染料的核酸扩增反应，所述荧光染料能与所述核酸扩增反应的双链扩增产物结合；

所述增强剂具有结合所述荧光染料的结构域和淬灭基团，所述淬灭基团用于淬灭所述结构域所结合的荧光染料所发射的荧光，所述结构域与所述荧光染料结合的亲和力低于所述核酸扩增反应的目标扩增产物与所述荧光染料结合的亲和力。

2.根据权利要求1所述的增强剂，其特征在于，所述增强剂为DNA核酸分子，所述DNA核酸分子具有通过碱基互补配对原则结合的双链结构区，与所述荧光染料结合的所述结构域为所述双链结构区；所述淬灭基团位于所述双链结构区的5’端或3’端；

优选地，所述DNA核酸分子为单链DNA核酸分子，所述单链DNA核酸分子具有至少一个茎结构区；所述茎结构区由5’端茎杆区和3’端茎杆区通过碱基互补配对结合构成；所述双链结构区为所述茎结构区；所述淬灭基团位于所述5’端茎杆区的5’端或所述3’端茎杆区的3’端。

3.根据权利要求2所述的增强剂，其特征在于，所述茎结构区的长度短于所述扩增产物的长度；

优选地，所述茎结构区的长度与所述目标扩增产物的长度的比值为2-16:100；

优选地，所述茎结构区的长度与所述目标扩增产物的长度的比值为2-9:100或10-16:100；

优选地，所述茎结构区的长度与所述目标扩增产物的长度的比值为8.5:100。

4.根据权利要求2所述的增强剂，其特征在于，所述茎结构区的长度2-20bp；

优选地，所述茎结构区的长度为2-8bp或10-15bp；

优选地，所述茎结构区的长度为8bp；

优选地，所述扩增产物的长度为50-1000bp。

5.根据权利要求2-4任一项所述的增强剂，其特征在于，所述茎结构区的所述5’端茎杆区的碱基序列从5’端至3’端为CC、CCGC、CCGCTG、CCGCTGCG、CCGCTGCGCG或CGTGCCGCTGGTCGC。

6.根据权利要求5所述的增强剂，其特征在于，所述单链DNA核酸分子还具有环结构区；

所述环结构区的长度为10-14nt；

优选地，所述环结构区的任意位置的碱基选自A、T、C和G中的任意一种；

优选地，所述环结构区的任意位置的碱基为A。

7.根据权利要求6所述的增强剂，其特征在于，所述单链DNA核酸分子的线性化的碱基序列如SEQ ID NO.1-7中任意一种所示。

8.根据权利要求2-4任一项所述的增强剂，其特征在于，所述荧光染料选自SYBR GreenI、EvaGreen、Sytox Green、EtBr、SYBR Green II、SYBR Gold、SYBR Safe、LC Green、GelGreen、GelRed、DAPI、Syto 9、Sytox Blue、Sytox Red、Sytox Orange和ThiazoleOrange中任意一种；

优选地，所述淬灭基团为能够通过FRET机制吸收所述荧光染料发射荧光的基团；

优选地，所述淬灭基团选自BHQ、BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl和TAMRA中任意一种。

9.根据权利要求1所述的增强剂，其特征在于，所述核酸扩增反应选自链式聚合酶反应和等温扩增反应的任意一种。

10.一种核酸扩增反应液，其特征在于，其含有权利要求1-9中任一项所述的增强剂。

11.一种可进行核酸扩增反应的数字微流控芯片，其特征在于，其装载有权利要求10所述的核酸扩增反应液或具有装载所述核酸扩增反应液的结构。