[发明专利]一种非标记型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种非标记型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法及应用，属于电化学传感器技术领域，利用钛酸盐‑聚(3，4‑乙撑二氧噻吩)/金纳米粒子的复合材料作为信号放大材料，前列腺特异性抗体作为分子识别原件，构建出一种新型非标记型免疫传感器，实现对前列腺特异性抗原的快速、灵敏检测。本发明所构建的非标记型前列腺特异性抗原免疫传感器具有检测范围广、检测下限低、灵敏度高、操作简单、检测速度快等优点，为的早期诊断提供了一种可靠的检测手段，其线性检测范围是0.0001ng/mL‑20ng/mL，最低检测下限为40fg/mL。

技术领域

本发明属于电化学传感器技术领域，具体涉及一种非标记型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法及应用。

背景技术

近年来，前列腺癌(PCa)的发病人数和死亡人数一直呈增长趋势，是男性中第二常见的非皮肤癌。另外，美国食品与药物管理局指出，前列腺特异性抗原是唯一可接受的用于诊断前列腺癌的肿瘤标志物，因此，对前列腺特异性抗原的测定，对于减少前列腺癌死亡风险有积极的作用。

近年来，电化学免疫传感器备受关注，被广泛应用于肿瘤标志物的检测。而非标记型电化学免疫传感器是基于抗原和抗体特异性结合的一种分析方法，具有检测迅速、检出限低、灵敏度高、操作简单和制备成本低的优点。

发明内容

本发明提供一种非标记型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法及应用，利用钛酸盐-聚(3,4-乙撑二氧噻吩)/金纳米粒子的复合材料作为信号放大材料，前列腺特异性抗体作为分子识别原件，构建出一种新型非标记型免疫传感器，实现对前列腺特异性抗原的快速、灵敏检测。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种非标记型检测前列腺特异性抗原的电化学免疫传感器的制备方法，包括工作电极，参比电极和对电极，所述工作电极为玻碳电极表面依次修饰钛酸盐-聚(3,4-乙撑二氧噻吩)/ 金纳米粒子的复合材料、前列腺特异性抗体、牛血清蛋白，所述参比电极为饱和甘汞电极，所述对电极为铂片电极；制备方法包括以下步骤：

(1)制备钛酸盐-聚(3,4-乙撑二氧噻吩)复合材料，即M-NTO-PEDOT复合材料；

(2)制备非标记型检测前列腺特异性抗原电化学免疫传感器的工作电极；

(3)制备非标记型检测前列腺特异性抗原电化学免疫传感器的工作曲线。

优选的，所述步骤(1)具体包括以下步骤：

①制备钛酸盐

将1g LiF,加入20mL浓度为9mol L^-1的盐酸中，待LiF溶解后，将1g Ti₃AlC₂慢慢加入该溶液中，在40℃下磁力搅拌24小时，离心，去上清液，用去离子水洗涤至中性，60 ℃下真空干燥6小时，得到Ti₃C₂粉末；将100mg的Ti₃C₂粉末，30mL浓度为1mol L^-1的氢氧化钠溶液和0.68mL质量分数为30％的过氧化氢溶液混合，然后将混合悬浮液在140℃下加热12小时，洗涤并烘干，得到钛酸盐，即M-NTO；

②制备钛酸盐-聚(3,4-乙撑二氧噻吩)复合材料

称取90mg上述钛酸盐溶于10mL的水中，同时取200mg的3,4-乙撑二氧噻吩溶于2mL的乙醇中，混合上述溶液磁力搅拌5分钟；配置4mL浓度为1mol L^-1的FeCl₃·6H₂O溶液, 慢慢滴加入上述混合悬浮液中,在磁力搅拌条件下，常温反应24小时，反应完毕后离心，去上清，乙醇洗涤后离心，去上清，将沉淀在真空干燥箱中60℃干燥，得到钛酸盐-聚(3,4- 乙撑二氧噻吩)复合材料，即M-NTO-PEDOT复合材料。