[发明专利]应用TLC-CMS-IR检测米糠神经酰胺类化合物的方法

说明书

本发明方法以米糠为原料，用70%乙醇为提取剂，料液比1:10，经超声波微波萃取仪辅助处理获得神经酰胺类化合物粗提取液，经薄层层析分离和纯化后测定其含量，红外光谱仪对其进行定性分析。结果显示：神经酰胺最佳展开剂为（氯仿:甲醇:乙酸=19:0.8:0.1，v/v），显色后呈红色斑点，清晰无拖尾，供试样液与神经酰胺对照品有相同的R_f值，为0.42。反射式扫描显示峰面积值与含量线性关系良好（r=0.9985），外标两点法测定米糠中神经酰胺含量为0.74%。经质谱仪检测，供试液分子信息与神经酰胺标准品基本一致。供试样品与神经酰胺标准品红外光谱图对比显示出羟基、羰基和酰胺基的特征峰，初步判定为是神经酰胺类化合物。

技术领域

本发明涉及神经酰胺类化合物检测领域，具体为一种应用TLC-CMS-IR检测米糠神经酰胺类化合物的方法。

背景技术

小米是我国北方主要的杂粮农作物，它具有生产周期短，耐干旱，营养丰富等特征。而小米去皮后的产物小米糠是由小米的果皮层、糊粉层和米胚芽三部分构成。米糠有好多营养，但是被人们忽视了，在过去的时间里常常会被人们忽略因此导致利用率不高，但是最近几年对米糠的不断深入了解研究，研究人员发现了米糠在营养方面具有不容小觑的价值，并且米糠中含有生物碱、甾醇、三萜类、谷维素、神经酰胺等营养的物质，可以使用这些来加工一些不同种类的食品，因此也可以把米糠作为是十分优质的原材料。虽然米糠有丰富的营养价值且资源充足，但是由于会发生酸败现象，也会因为外界的许多原因受到污染破坏导致风味变差等问题，所以大部分米糠被当作废料进行处理。但随着人们认识观念的转变和科学技术的发展，米糠越来越被人们重视，合理利用米糠会产生巨大的经济效益，而且也不会被浪费，使小米的食用价值和营养价值更高。

神经酰胺（ceramide，结构式如图1所示），N-脂酰鞘胺醇，是神经鞘磷脂的基本单位，鞘磷脂是细胞膜的一个组成部分。它还是体内重要的一类生物活性物质，具有屏障、粘附、保湿、增强免疫力、防癌、抗癌等功能。神经酰胺具有很强的保水和保湿性能，因此它多用于化妆品行业。此外，神经酰胺作为体内重要的第二信使，引起了研究者的广泛关注。目前通过研究发现，神经酰胺可以通过一系列方式参与信息的传导，因此也会影响到一些生理和病理过程。目前，在神经酰胺的开发和应用中，最重要的是将其作为保湿剂添加到化妆品中。但也尝试将天然神经酰胺作为开发利用的食品原料，并取得了一定的进展。而日本和法国已经有这类食品上市，目前国内对这类食品的研究还不多，有待进一步研究。

以米糠为原料提取神经酰胺等生物活性物质，进行相关产品的研发，将有望获得有重要价值的产物，对资源的综合利用和可持续发展有重要意义。

目前也有许多人对神经酰胺展开了各种研究，各种方法来检测神经酰胺。到目前为止，已经知道的检测方法有苯甲酰化-紫外检测、荧光标记-荧光检测和蒸发光散射检测。近年来，质谱和生化分析也被应用于神经酰胺的检测。Iwamori等人首次提出了神经酰胺的苯甲酰化-紫外检测方法，其基本原理是用某些试剂与神经酰胺反应，形成在230~280nm处具有较强紫外吸收的N-酰基化合物。从而实现了神经酰胺的间接紫外检测。Previati等人发展了神经酰胺柱前衍生化的NAP荧光标记和荧光检测方法。但在小米米糠中用薄层色谱检测神经酰胺还未曾见报道。

发明内容

本发明是在前人研究的基础上，以米糠为例，提供一种应用TLC-CMS-IR检测米糠神经酰胺类化合物的方法。该方法采用TLC-IR技术检测米糠中神经酰胺类化合物，是对资源的有效利用，且运用本方法通过超声波微波萃取结合薄层层析色谱技术对米糠中神经酰胺类物质分离提纯，该方法设备简单，操作简便，分离速度快，精确度高，适用于从米糠中分离纯化神经酰胺。

本发明是采用如下技术方案实现的：

一种应用TLC-CMS-IR检测米糠神经酰胺类化合物的方法，包括如下步骤：

（1）、米糠中神经酰胺样品的粗提取