[发明专利]用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物及其制备方法

说明书

本发明属于二抗检测系统技术领域，具体涉及用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物及其制备方法，其利用树枝状聚酰胺胺结构上的‑NH₂官能团与结合酶蛋白、免疫球蛋白上的‑COOH官能团进行酰胺化反应，使蛋白分子紧密结合在聚酰胺胺骨架结构上，增加单位体积蛋白的浓度，制备出了相比市面产品具有更高的检测灵敏度，更低的背景和更低成本的二抗聚合物，具有广阔的市场应用前景，实质性特点显著。

技术领域

本发明涉及二抗检测系统技术领域，具体而言，涉及用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物及其制备方法。

背景技术

目前国内科研机构以及临床诊断机构所使用的免疫组化即用型二抗检测系统主要有两种，一种是通过卵白素-生物素或者链霉素-生物素之间的高亲和力而对检测信号进行放大的二抗检测系统(生物素检测系统)；另一种是通过在聚合物上耦联多个抗体和酶的方式而对信号进行放大的二抗检测系统(“酶-聚合物-抗体”检测系统)。生物素检测系统有时会受到待测组织的内源性生物素的干扰而产生假阳性结果，从而会影响结果的准确性，因此此种二抗检测系统在国内的应用逐渐在减少，特别是在临床辅助诊断的应用日益减少；“酶-聚合物-抗体”检测系统，不会受到待测组织内源性生物素的干扰，染色背景低，操作步骤及时间较少，集准确、方便、快捷的优点于一身，因此其在临床辅助诊断中的应用也越来越广泛。

随着肿瘤发病率逐年上升，病理科疫组化项目越发显得重要，且每年递增15％，其市场潜力巨大。

二抗使用量市场资料(包括仪器二抗)：全国约1192家三级医院(其中三甲医院779家，2018年统计)，1888家二甲医院。基本上每家三级医院、60％的二甲医院都有开展免疫组化项目，根据2018年调查的不完全资料显示，手工免疫组化染色二抗试用量平均为40ml，按照80元/ml计算，全国约为413家三级医院、1132家二甲医院，年销售额为4900万。

三甲医院基本是仪器染色，按照80元/片，每家医院年均15000张片子计算，年销售额为93亿元。

目前国内市场上供应“酶-聚合物-抗体检测系统”二抗产品的公司主要有：

Dako基因公司(Envision二抗)，约占市场份额的35％；

福建迈新(Maxvision二抗)，约占市场份额的50％；

北京中杉金桥(PV6000二抗)，约占市场份额的15％；

仪器二抗市场份额目前的分布情况：

罗氏诊断仪器约占市场份额的65％；

徕卡诊断仪器约占市场份额的20％；

其余品牌合计约占市场份额的15％；

国产销售的二抗产品大多是进口分包装，在聚合物结构设计、制备工艺上没有大的改进，具体体现在：单位体积内酶、抗体数量没有显著增加；聚合物空间位阻没有明显降低，导致国产二抗产品相对于进口产品，价格没有明显降低，灵敏度没有改善。

发明内容

为了解决目前国内使用的“酶-聚合物-抗体”检测系统(二抗)大多依赖进口，价格昂贵、使用成本高，灵敏度无法提高的问题，提供用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物及其制备方法。

用于二抗检测系统的聚酰胺胺结构多聚物(即SL-PolyHRP聚合物，后文统一以该名称指代前文所述的聚酰胺胺结构多聚物)，所述聚酰胺胺结构多聚物包括树枝状聚酰胺胺2-13％，结合酶75-95％和免疫球蛋白2-13％，其结构式为：

其中，n≥1。

进一步地，所述树枝状聚酰胺胺的分子量为(1500-60000U)，其表面修饰基团为-NH₂，-NH₂基团的数量为32-128。