[发明专利]一种原核工程菌株及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201910911590.6 | 申请日： | 2019-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN110656076A | 公开（公告）日： | 2020-01-07 |
| 发明（设计）人： | 万霞;陈文超;黄凤洪;邓乾春;朱航志;蒋珊 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院油料作物研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/54;C12N9/10;C12N15/70;C12P7/62;C12R1/19 |
| 代理公司： | 11138 北京三高永信知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 吕耀萍 |
| 地址： | 430062 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 原核工程菌株 乙酰化 甘油三酯 规模化生产 甘油二酯 连接产物 转化产物 复苏液 高纯度 浓缩液 转移酶 制备 制备方法和应用 卡那霉素抗性 生物技术领域 氨基酸序列 感受态细胞 固体培养基 摇床培养 载体连接 蛋白 合成 转入 细胞 基因 | ||
1.一种原核工程菌株，其特征在于，所述原核工程菌株表达的蛋白为甘油二酯乙酰化转移酶，所述甘油二酯乙酰化转移酶的氨基酸序列表中SEQ ID NO:1所示。
2.一种如根据权利要求1所述的原核工程菌株的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
将EfDAcT基因与载体连接，得到连接产物；
将所述连接产物转入感受态细胞中，得到转化产物；
将所述转化产物于37℃下摇床培养0.6～1h，得到复苏液；
将所述复苏液离心，得到浓缩液；
将所述浓缩液涂布在含卡那霉素抗性的固体培养基上，于37℃下培养8～12h，得到所述原核工程菌株。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，采用热击法将所述连接产物转入所述感受态细胞中。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述热击法包括：将所述连接产物和所述感受态细胞混合后，置于冰上30～40min，得到混合液，将所述混合液置于42℃水浴锅中热击45s后，在冰上冷却2min，得到所述转化产物。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述载体为pCDFDuet-1或pRSFDuet-1。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述感受态细胞为大肠杆菌BL21(DE3)的感受态细胞。
7.一种如权利要求1所述的原核工程菌株的应用，其特征在于，所述应用包括：将所述原核工程菌株经过发酵培养合成乙酰化甘油三酯。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，将所述原核工程菌株在含有浓度为2～10％的甘油的发酵培养基中进行培养。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述原核工程菌株在所述发酵培养基中于120～180rpm的转速下摇床培养。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述培养的温度为25℃，所述培养的时间为36～48h。
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