[发明专利]一种异淀粉酶的基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种异淀粉酶的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以E.coli BW25113为宿主菌，表达异淀粉酶基因A0A147KK56，所述异淀粉酶基因A0A147KK56的核苷酸序列如SEQNo.1所示，所述基因工程菌构建方法为：将异淀粉酶基因A0A147KK56连接到表达载体pBADHisB上，得到合成质粒A0A147KK56/pBAD HisB；将合成质粒A0A147KK56/pBAD HisB转化到大肠杆菌E.coli BW25113宿主菌中，得到基因工程菌E.coli BW25113(A0A147KK56/pBADHisB）。

2.根据权利要求1所述的异淀粉酶的基因工程菌，其特征在于所述合成质粒A0A147KK56/pBAD HisB转化到大肠杆菌E.coli BW25113宿主菌的具体步骤为：

（1）取一支储存于-80℃含有50~200 μL的E.coli BW25113感受态细胞在冰上解冻20~30 min；

（2）在合成质粒固体粉末中加入40 μL的ddH₂O，充分混匀；

（3）取2~3 μL的步骤（2）合成质粒溶液加入步骤（1）解冻后的感受态细胞中，加入过程中用手指轻轻拨弹；

（4）将步骤（3）产物在冰上放置20~30 min，再将其放置在42℃水浴锅中水浴120 s进行热击，热击完成后立即取出放回冰上静置2~5 min；

（5）加入800 μL的2YT液体培养基，并在振荡频率为200 rpm的37℃振荡培养箱培养40min；

（6） 取步骤（5）的转化菌液50 μL涂布于2YT固体培养基平板上，于37℃培养10~12 h；

（7）挑选单菌落至含100 μg/mL氨苄青霉素的抗性液体2YT培养基中，于37℃培养6~8h；

（8）取等体积菌液与等体积无菌80%（体积）甘油溶液混合放置于保菌管，储存于-80℃冰箱，备用。

3.根据权利要求1或2所述的异淀粉酶的基因工程菌，其特征在于，所述异淀粉酶的基因工程菌诱导产酶的具体方法如下：

（1）将-80℃保存的基因工程菌E.coli BW25113(A0A147KK56/pBAD HisB）在2YT固体培养基平板上划线分离，于37℃恒温培养箱中培养24 h，得到单克隆菌落；

（2）挑取单克隆菌落接种至2YT液体培养基中，于37℃培养4~6 h，后将所得培养液按1%~2%的接种量接种至摇瓶中，于37℃，200 rpm培养2~3 h后；

（3）用最终浓度为1%~2%（质量）的阿拉伯糖诱导产酶，诱导温度为25℃~30℃，诱导转速为220 rpm，诱导时间为14~18 h。

4.根据权利要求3所述的异淀粉酶的基因工程菌，其特征在于，所述2YT固体培养基成分为分子级蛋白胨9~11 g/L，分子级酵母粉4~6 g/L，NaCl 4~6 g/L，琼脂粉1.5%~2%（质量），氨苄青霉素100 μg/mL，pH为6.8~7.2。

5.根据权利要求3所述的异淀粉酶的基因工程菌，其特征在于，所述2YT液体培养基成分为分子级蛋白胨9~11 g/L，分子级酵母粉4~6 g/L，NaCl 4~6 g/L，pH为6.8~7.2。

6.根据权利要求1~5任一项所述的异淀粉酶的基因工程菌在合成α-环糊精中的应用。