[发明专利]一种单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法

权利要求书

1.单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法，包括以猪脑粉为原料，利用超临界萃取法结合硅胶柱层析获得总神经节苷脂，利用固定化重组唾液酸酶生物转化结合反相硅胶获得高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的步骤。

2.根据权利要求1所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法，其特征在于：所述方法包括利用3-4倍体积丙酮对猪脑进行预处理，除去水分、水溶杂质和胆固醇，获得猪脑粉，丙酮溶液蒸馏回收再用。

3.根据权利要求1或2所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法，其特征在于：利用超临界二氧化碳流体(SCE)中加入携带剂，选择性溶解含有神经节苷脂的组分。采用硅胶柱层析进行总神经节苷脂的纯化，干法上样，利用溶液A进行洗脱，减压干燥得到总神经节苷脂。

所述携带剂为60％-80％乙醇，携带剂加入量与脑粉的体积与质量比为3:1-5:1萃取温度为50-70℃，萃取压力为60-80Mpa萃取时间为4-6小时。所述溶液A由乙酸乙酯和甲醇组成，所述溶液A中乙酸乙酯和甲醇的体积比为1:1。

4.根据权利要求1-3任一所述单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法，其特征在于：以总神经节苷脂为底物，利用固定化重组唾液酸水解酶进行生物转化，提高总神经节苷脂中单唾液酸四己糖神经节苷脂的含量。将反应物离心，使单唾液酸四己糖神经节苷脂进入上清液中，收集上清液经膜过滤后冷冻干燥，沉淀为固定化重组唾液酸水解酶，回收再生待用。

所述反应温度在30-42℃，反应时间1-3小时，固定化酶重复使用次数为5-10次。

5.根据权利要求1-4任一所述单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法，其特征在于：利用反相硅胶对权利4所述干燥粉末进行纯化，利用90％甲醇溶液洗脱，根据紫外220nm吸收值，收集单唾液酸四己糖神经节苷脂级份，将所述级分干燥，得到单唾液酸四己糖神经节苷脂。

6.权利要求1所述方法中的所述超临界萃取法结合硅胶柱法在制备单唾液酸四己糖神经节苷脂中的应用。

7.权利要求1所述方法中所述固定化重组唾液酸酶生物转化结合反相硅胶法在制备单唾液酸四己糖神经节苷脂中的应用。