[发明专利]一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法

说明书

本发明属于园艺作物抗病性鉴定技术领域，具体涉及一种辣椒疫病抗性浸根接种鉴定方法。本发明包括辣椒苗准备、孢子悬浮液制备、接种、病情调查与评价等步骤，即在苗龄为5～6真叶期时，采用浓度为10个游动孢子/mL的孢子悬浮液浸泡辣椒苗的裸露根部和茎基部，接种后第5 d调查病情指数，以病情指数进行分级，评价品种的抗感特性。本发明利用浸根接种法进行抗性鉴定，其优势在于接菌浓度低，解决了大量培养菌的耗时耗力问题，病菌与根部接触，符合自然发病情况，病情指数分级标准科学，接种环境要求低，易掌握，为大规模辣椒抗病育种材料的筛选提供技术支持。

技术领域

本发明涉及植物病害鉴定技术领域，特别涉及一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法。

背景技术

辣椒疫病在我国的发生危害日益严重，已成为影响辣椒生产的主要病害之一。该病由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici L.)引起，是以孢子囊在土壤、田间病残体上越冬，借助雨水或灌溉水传播病害。辣椒疫病是游动孢子侵染根部引起病害。幼苗期发病，多从茎基部开始染病，病部出现水渍状软腐，病部以上倒伏。定植后染病，叶片软腐脱落，茎产生暗绿色病斑，果实发病为水渍状不规则形病斑，果肉软腐。该病害发病周期短，流行速度迅猛，成为辣椒生产上的毁灭性病害，给辣椒产业带来严重的经济损失。一般病株率为20-30％，严重时达80％以上。

抗病品种的选育和推广是控制辣椒疫病的主要手段。准确评价品种的抗性显得尤其重要。多年的抗性鉴定方法研究工作表明：病害调查分级标准是抗病鉴定的的重要环节，有的方法分级标准是依据发病面积占植株面积的百分比来划分，如离体叶片接种法，存在发病面积小且不规则的问题；离体接种法，如以叶片或果实作为鉴定材料，忽略了系统抗性反应，且接种时环境控制尤其是湿度控制要求严格。灌根法是目前最常用的辣椒疫病鉴定方法，但该方法需要大量的孢子，而现有的采用固体培养基培养疫霉菌，大量繁殖疫霉菌的工作量太大，不适于大量材料的筛选，为大规模抗疫病育种材料的筛选带来了不便。

因此，建立一套大规模、稳定、准确、简易，最大限度体现出辣椒品种真实抗病性的人工抗病性鉴定方法是一个亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法，从而克服现有技术的上述缺陷。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)辣椒苗准备：选取饱满的辣椒种子消毒催芽处理，然后单粒点播在盛有育苗基质的穴盘内，选取健康完整的辣椒苗用于接种；

(2)孢子悬浮液制备：将辣椒疫霉菌菌种接种在燕麦固体培养基上进行培养，在25℃下恒温暗培养7d，然后在28℃光照/25℃暗交替培养7d，诱导产生孢子囊，用无菌水冲洗菌体，在4℃放置30min获得孢子悬浮液，通过无菌水稀释，配制成一定浓度的孢子悬浮液，用于接种；

(3)接种：步骤(1)的辣椒苗生长到一定时期后，用无菌水冲洗干净根部，除去育苗基质，然后用吸水纸拭去表面的水分。50ml锥形瓶内加入孢子悬浮液30ml，每个锥形瓶内插入6棵苗，孢子悬浮液浸泡辣椒苗的根部和茎基部。接种后将植株置于温度28℃光照16h，25℃黑暗8h的植物培养箱内，在侵染期间锥形瓶内水缺少时，补充无菌水；

(4)病情调查与评价：接种后，待出现辣椒疫病发病症状后，选择适宜时间调查每株苗发病情况，按幼苗病情级别进行病情指数调查，进行抗性评价。

苗期辣椒疫病分级标准如下：0级—无症状；1级—幼苗根茎部轻微水浸状病斑，叶片不萎蔫或可恢复性萎蔫；2级—幼苗根茎部水浸状病斑2cm-3cm，叶片不可恢复性萎蔫，下部叶片偶有脱落；3级—幼苗根茎部水浸状病斑超过3cm，叶片明显萎蔫或落叶明显；4级—幼苗根茎部水浸状病斑大面积蔓延，除生长点外全部落叶或植株萎蔫；5级—植株枯死。