[发明专利]一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法

权利要求书

1.一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）辣椒苗准备：选取饱满的辣椒种子消毒催芽处理，然后单粒点播在盛有育苗基质的穴盘内，选取健康完整的辣椒苗用于接种；

（2）孢子悬浮液制备：将辣椒疫霉菌菌种接种在燕麦固体培养基上进行培养，在25 ℃下恒温暗培养7 d，然后在28 ℃光照/25 ℃暗交替培养7 d，诱导产生孢子囊，用无菌水冲洗菌体，在4 ℃放置30 min获得孢子悬浮液，通过无菌水稀释，配制成一定浓度的孢子悬浮液，即可用于接种；

（3）接种：步骤（1）的辣椒苗生长到一定时期后，用无菌水冲洗干净根部，除去育苗基质，然后用吸水纸拭去表面的水分。50 ml锥形瓶内加入孢子悬浮液30 ml，每个锥形瓶内插入6棵苗，孢子悬浮液浸泡辣椒苗的根部和茎基部。接种后将植株置于温度28 ℃光照16 h，25 ℃黑暗8 h的植物培养箱内，在侵染期间锥形瓶内水缺少时，补充无菌水；

（4）病情调查与评价：接种后，待出现辣椒疫病发病症状后，选择适宜时间调查每株苗发病情况，按幼苗病情级别进行病情指数调查，进行抗性评价。

苗期辣椒疫病分级标准如下：0级—无症状；1级—幼苗根茎部轻微水浸状病斑，叶片不萎蔫或可恢复性萎蔫；2级—幼苗根茎部水浸状病斑2 cm-3 cm，叶片不可恢复性萎蔫，下部叶片偶有脱落；3级—幼苗根茎部水浸状病斑超过3 cm，叶片明显萎蔫或落叶明显；4级—幼苗根茎部水浸状病斑大面积蔓延，除生长点外全部落叶或植株萎蔫；5级—植株枯死。

病情指数＝ ∑（各级病株数×相对级值）/（ 调查总株数×最高级值）×100

辣椒疫病抗性评价标准：免疫（I）病情指数=0；高抗（HR）0<病情指数≦10；抗病（R）10<病情指数≦30；中抗（MR）30<病情指数≦50；感病（S）50<病情指数≦70；高感（HS）病情指数>70。

2.根据权利要求1所述的一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法，其特征在于，所述步骤（1）的辣椒种子消毒催芽处理包括：将辣椒种子用52～55 ℃的温水浸种30 min，10%的次氯酸钠溶液浸泡5 min，清水冲洗后浸种催芽，播种于穴盘内，育苗基质为蛭石、草炭和土壤（1：2：1），经高温蒸汽灭菌（134 ℃，30 min）。

3.根据权利要求1所述的一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法，其特征在于，所述步骤（2）的燕麦固体培养基的制作方法为：将燕麦片20 g，水1000 ml，煮沸30 min，双层纱布过滤去渣，上清液补足水至1000 ml，加入琼脂20 g，煮至琼脂溶化，121 ℃下高压灭菌20 min。

4.根据权利要求1所述的一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法，其特征在于，所述步骤（2）的接种孢子悬浮液的浓度为10个游动孢子/mL。

5.根据权利要求1所述的一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法，其特征在于，所述步骤（3）的辣椒苗生长到一定时期是指5～6真叶期。

6.根据权利要求1所述的一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法，其特征在于，所述步骤（4）的适宜调查时间为接种后第5 d。