[发明专利]基于LAMP技术的转基因玉米Bt176相关基因检测方法及试剂盒

权利要求书

1.基于LAMP技术的转基因玉米品系Bt176转基因成分cry1Ab基因的特异性LAMP引物，其特征是：根据转基因玉米品系Bt176的cry1Ab基因特异性设计，包括外引物、内引物、环引物：

外引物cryB3：GCCCCAGATGATGTCCACC

外引物cryF3：ATGGACAACAACCCCAACAT

内引物cryBIP：CACCCCCATCGACATCAGCCTAGGCCCAGCACGAAGC

内引物cryFIP：TAGCCGGTCTCGATGCGCTCCAACGAGTGCATCCCCTAC

环引物cryLB：GAGCCTGACCCAGTTCCT

环引物cryLF：GGGGTTGCTCAGGCAGTT。

2.基于LAMP技术检测转基因玉米品系Bt176中转基因成分cry1Ab基因的基础检测试剂盒，其特征是：包括权利要求1所述LAMP外引物、内引物。

3.基于LAMP技术检测转基因玉米品系Bt176中转基因成分cry1Ab基因的加速检测试剂盒，其特征是：包括权利要求1所述LAMP外引物、内引物、环引物。

4.根据权利要求2或3所述的检测试剂盒，其特征是：还包括DNA聚合酶、dNTPs、10×LAMP反应缓冲液、去离子水。

5.根据权利要求2或3所述的检测试剂盒，其特征是：还包括信号报告分子用于指示检测结果，信号报告分子是SYBR Green I、羟基萘酚蓝或中性红。

6.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征是：所述10×LAMP反应缓冲液包括200 mMpH8.8的Tris-HCl，600 mM KCl，80 mM MgSO₄，100 mM (NH₄)₂SO₄，1% Triton X-100。

7.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征是：以中性红为信号报告分子时，10×LAMP反应缓冲液包括50 mM pH8.8的Tris-HCl，600 mM KCl，80 mM MgSO₄，100 mM (NH₄)₂SO₄，1% Triton X-100。

8.基于LAMP技术的玉米转基因成分cry1Ab基因的检测方法，其特征是：

（1）待测样本DNA的提取；

（2）以步骤（1）提取到的DNA为模板，选用权利要求1所述的玉米转基因成分cry1Ab基因的LAMP引物或权利要求2或3所述的检测试剂盒进行LAMP反应；

（3）LAMP扩增产物分析：有扩增信号，则待测样本中含有玉米转基因成分cry1Ab基因；无扩增信号，则待测样本中不含玉米转基因成分cry1Ab基因。

9.根据权利要求8所述的基于LAMP技术的玉米转基因成分cry1Ab基因的检测方法，其特征是：所述LAMP反应采用基础扩增反应体系或加速扩增反应体系；基础扩增反应体系包括LAMP外引物、内引物、DNA聚合酶、dNTPs、甜菜碱、10×LAMP反应缓冲液、去离子水；加速扩增反应体系包括LAMP外引物、内引物、环引物、DNA聚合酶、dNTPs、甜菜碱、10×LAMP反应缓冲液、去离子水。