[发明专利]利用非渗透抗冻剂和开放式载具冷冻保存石斑鱼胚胎方法

权利要求书

1.一种利用非渗透抗冻剂和开放式载具冷冻保存石斑鱼胚胎方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)非渗透性抗冻剂配制：以高温灭菌过的过滤海水为基础溶液配制1mol/L非渗透性糖溶液；所述的糖为蔗糖、海藻糖或葡萄糖中的一种；

(2)石斑鱼胚胎的收集和培养：获得云纹石斑鱼受精卵，将受精卵在22-24℃海水培养，等胚胎发育至肌节期、尾芽期或胚体转动期进行冷冻保存;

(3)开放式胚胎冷冻载具制备:准备40-50 ml塑料管和筛绢网，塑料管高100-116 mm，直径28-30mm，塑料管两端开口，一端用筛绢网封口；

(4)胚胎冷冻：将配制好的非渗透性糖溶液加入培养皿中，并放置一定数量云纹石斑鱼胚胎，处理4-10分钟；之后将处理胚胎倒入所述步骤(3)的开放式胚胎冷冻载具，开口朝上垂直浸入液氮中冷冻保存;

胚胎解冻和培养：将高温灭菌过的过滤海水置于玻璃烧杯中，并将过滤海水温度控制在25-35 °C；将所述步骤(4)中含冷冻胚胎的开放式胚胎冷冻载具浸入过滤海水中，轻轻搅动并解冻；然后，将烧杯置于26°C生化培养箱中，半小时后更换海水，继续培育。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述筛绢网的网目直径为0.180mm ，规格为60×60mm。