[发明专利]一种骨髓间充质干细胞的增殖培养方法

权利要求书

1.一种骨髓间充质干细胞的增殖培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、分离提取骨髓细胞，接种后进行原代培养，待培养至细胞融合度达到80-90％时，用胰酶溶液消化，进行传代培养；

S2、待P3-P5代骨髓间充质干细胞培养至细胞融合度达到80-90％时，用胰酶溶液消化，接种至预铺促贴壁材料的培养容器中，加入增殖培养基进行培养，即可；

所述增殖培养基包括下述成分：柚皮苷，姜黄素，维生素C，成纤维细胞生长因子，胰岛素，胎牛血清，基础培养基。

2.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞的增殖培养方法，其特征在于，所述增殖培养基包括下述成分：柚皮苷3-6μg/mL，姜黄素1.2-2.4μg/mL，维生素C 20-30μg/mL，成纤维细胞生长因子5-10ng/mL，胰岛素10-15μg/mL，胎牛血清10％，基础培养基补足。

3.根据权利要求1或2所述的骨髓间充质干细胞的增殖培养方法，其特征在于，所述基础培养基为α-MEM培养基或者DMEM/F12培养基。

4.根据权利要求1-3任一项所述的骨髓间充质干细胞的增殖培养方法，其特征在于，所述促贴壁材料包括胶原蛋白和胶原三肽，优选地，所述胶原蛋白和胶原三肽的质量比为1：(0.01-0.1)；优选地，所述胶原三肽为棕榈酰三肽-1或者棕榈酰三肽-5。

5.根据权利要求1-4任一项所述的骨髓间充质干细胞的增殖培养方法，其特征在于，所述促贴壁材料的预铺处理方法为：将促贴壁材料溶于醋酸溶液中配制成质量浓度为0.5-1％的促贴壁材料溶液，然后铺于培养容器上，干燥后即可；优选地，所述促贴壁材料溶液的用量为80-150μg/cm²。

6.根据权利要求1-5任一项所述的骨髓间充质干细胞的增殖培养方法，其特征在于，所述步骤S1中，传代培养的比例为1:3-1:4。

7.根据权利要求1-6任一项所述的骨髓间充质干细胞的增殖培养方法，其特征在于，所述胰酶溶液的浓度为0.15-0.25％。

8.根据权利要求1-7任一项所述的骨髓间充质干细胞的增殖培养方法，其特征在于，所述步骤S2中，培养的接种密度为1-2×10⁴个/mL。

9.根据权利要求1-8任一项所述的骨髓间充质干细胞的增殖培养方法，其特征在于，所述步骤S2中，培养的具体条件为：5％CO₂,37℃。