[发明专利]TCRγδ为靶点的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明公开了一种TCRγδ为靶点的嵌合抗原受体及其应用，从N端到C端顺次拼接信号肽、单链抗体ScFv、Strep tagⅡ、CD8 hinge、CD28跨膜区、CD28胞内结构域、4‑1BB和CD3ζ链，所述单链抗体ScFv能够识别肿瘤细胞表面的TCRγδ。该TCRγδ为靶点的嵌合抗原受体用于修饰免疫细胞，修饰后的免疫细胞能有效地杀伤任何表面表达TCRγδ的肿瘤细胞。

技术领域

本发明涉及医药生物领域，具体是指一种以TCRγδ为靶点治疗γδT细胞淋巴瘤/白血病的嵌合抗原受体(CAR)及其应用。

背景技术

CAR-T细胞疗法成为近年来最为火热和有效的肿瘤治疗手段之一，CAR-T细胞全称为嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor T-Cell),原理为通过基因工程的方法，将能识别某种肿瘤抗原的抗体单链可变区(Scfv)与CD3ζ链的胞内区在体外偶联为一个嵌合蛋白，通过基因转导的方法转染体外培养的患者T细胞，使其表达嵌合抗体受体(CAR)。患者的T细胞被“重编程”后，生成大量具有杀伤性的CAR-T细胞，能够特异性的靶向肿瘤细胞。CAR-T与传统的免疫疗法相比，具有治疗更精确、靶向更精准、杀瘤更广泛、效果更持久等显著优势。

T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病(T-LBL/ALL)是高度恶性且复发率侵袭性淋巴瘤，主要高发于男性群体，在小儿和成人非霍奇金淋巴瘤中分别占30％和2％左右。依据T细胞抗原受体(TCR)类型差异，通常将成熟的T细胞分为γδT细胞亚型和αβT细胞亚型。在T细胞淋巴瘤/白血病中，一些特定的肿瘤细胞起源于γδT细胞，因此肿瘤细胞表面均会强表达TCRγδ，例如皮肤γδT细胞淋巴瘤，肝脾T淋巴细胞瘤及一部分外周T细胞淋巴瘤，亲上皮性肠道T淋巴细胞瘤等淋巴瘤疾病。γδT细胞淋巴瘤在临床上面临着没有特定药物靶点从而导致治疗效果差，复发率高和死亡率高等现象。然而，并未见以TCRγδ为靶点有效治疗肿瘤方法。

因此，寻找合适的γδT细胞淋巴瘤特异性靶点有助于临床上改善该类肿瘤的治疗。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种以TCRγδ为靶点治疗γδT细胞淋巴瘤/白血病的嵌合抗原受体(CAR)，携带广谱性识别各亚型TCRγδ的ScFv序列的CAR-T细胞可以有效的杀伤任何表面表达TCRγδ的肿瘤细胞。

本发明提供一种嵌合型抗原受体，从N端到C端顺次拼接信号肽、单链抗体ScFv、Strep tag Ⅱ、CD8 hinge、CD28跨膜区、胞内结构域，胞内结构域包括胞内信号刺激域，所述单链抗体ScFv识别并结合肿瘤细胞表面的TCRγδ。

进一步地，嵌合型抗原受体的胞内结构域还包括共刺激结构域，共刺激结构域选自CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CD83中的一种或多种，优选为CD28和4-1BB；所述胞内信号刺激域选自CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD8、FcγRI-γ、FcγRIII-γ、FcεRIβ、FcεRIγ、DAP10、DAP12、CD32、CD79a，优选为CD3ζ。

在本发明的一些实施例中，嵌合型抗原受体的单链抗体ScFv由重链可变区V_H、连接多肽Linker、轻链可变区V_L组成；优选地，所述重链可变区V_H的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述轻链可变区V_L的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，优选地，所述重链可变区V_H的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述轻链可变区V_L的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。