[发明专利]液相色谱-串联质谱法测定血浆中氯雷他定浓度的方法

说明书

本发明属于医药检测领域，涉及液相色谱‑串联质谱法测定血浆中氯雷他定浓度的方法，尤其是测定大鼠血浆中氯雷他定浓度的方法。本发明测定大鼠血浆中氯雷他定的含量的方法，具体步骤如下：(1)血浆样品的制备；(2)液液萃取处理；(3)液相色谱‑串联质谱法测定。本发明中，向血浆样品中加入内标工作溶液地西泮溶液和氢氧化钠溶液，并采用甲基叔丁基醚对血浆进行萃取，通过液相色谱‑串联质谱测定血浆中氯雷他定浓度。本发明的方法能够快速检测大鼠血浆中氯雷他定的含量，测定结果灵敏，快速，精密度好。而且克服了现有技术中其他方法复杂，检测限高等问题。

技术领域

本发明属于医药检测领域，涉及液相色谱-串联质谱法测定血浆中氯雷他定浓度的方法，尤其是测定大鼠血浆中氯雷他定浓度的方法。

背景技术

过敏性疾病作为一种常见的疾病，已渐渐成为全球关注的健康问题，受到了全球医护人员以及政府的关注。据报道，世界卫生组织的数据显示，目前全球有亿人患有过敏性疾病，且该病的发病率近年来迅猛上升。已将过敏性疾病列为二十一世纪需要重点研究和防治的三大疾病之一。临床上用于治疗过敏性鼻炎的抗组胺药物品种多，用药历史悠久。抗组胺药物的作用机理为选择性与组胺靶细胞上的受体结合而发挥抗组胺作用。

氯雷他定是一种高效的、高选择性抑制外周组胺受体的第二代抗组胺药。其化学名称为4-(8-氯-5，6-二氢-11H-苯并[5，6]环庚并[1，2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶羧酸乙酯，主要用于治疗季节性或常年性过敏性鼻炎，也可以用于缓解慢性荨麻疹及其他过敏性皮肤病的症状。因其对外周神经受体具有高选择性，而对中枢神经系统的受体亲和性较低。同时对乙酰胆碱和肾上腺素受体作用极少，因此氯雷他定与第一代抗组胺药物相比较，不易透过血脑屏障，无明显的中枢抑制和抗胆碱作用。氯雷他定进入体内起效迅速、作用持久，不仅因为氯雷他定有高选择性，而且其在体内的代谢产物地氯雷他定仍有药理学活性。该方法的建立可以应用于药代动力学研究，毒代动力学研究，生物等效性研究等。

发明内容

本发明目的旨在采用一种简单，快速，灵敏度高，精密度好的方法，测定大鼠血浆中氯雷他定的含量。本发明采用液液萃取方法作为样本的前处理技术，采用C18柱，利用液相色谱串联质谱作为检测器对氯雷他定进行检测分析。克服了其他方法复杂，检测限高等问题，快速检测大鼠血浆中氯雷他定的含量，测定结果灵敏，快速，精密度好。

本发明是通过如下方案实现的：

本发明通过对萃取试剂的条件进行优化，对流动相的参数，质谱的参数等进行优化，选用最优的条件，满足了定量检测的要求。

本发明测定大鼠血浆中氯雷他定的含量的方法，具体步骤如下：

(1)血浆样品的制备；

(2)液液萃取处理；

(3)液相色谱-串联质谱法测定；

其中，

步骤(1)中向血浆样品中加入内标工作溶液和氢氧化钠溶液，混匀；所述的内标工作溶液为地西泮溶液，其浓度为：10-20ng·mL^-1，加入量为：标准曲线工作溶液中间浓度的响应强度(5-10ng·mL^-1)；所述的氢氧化钠溶液，其浓度为：0.5-1mol·L^-1，加入量为：与血浆体积比为1：2-3。

步骤(2)中向步骤(1)中的血浆样品中加入萃取剂，涡旋2-3min，3500-4000rpm·min^-1离心10-15分钟，提取上清液，氮气吹干，乙腈复溶，涡旋2-3min，13000-15000rpm·min^-1离心5-10分钟。血浆体积：萃取剂体积：1：10-20；乙腈复溶加入量为：100μL；

所述的萃取剂选自乙醚，甲基叔丁基醚，乙酸乙酯，正己烷中的一种或多种混合物，优选甲基叔丁基醚；

步骤(3)中液相色谱条件如下：