[发明专利]一种利用胚性愈伤组织进行钻喙兰人工快繁的方法

说明书

本发明公开了一种利用胚性愈伤组织进行钻喙兰人工快繁的方法，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的蒴果剖开，其内种子接种于萌发培养基中，待愈伤组织出现后，进行胚愈伤组织诱导和增殖，原球茎分化、生长和增殖，生根培养，炼苗移栽。本发明的核心在于钻喙兰种皮破裂后产生胚性愈伤组织，进而分化出原球茎；在此基础上，对培养基进行了优化调整，将胚性愈伤组织增殖、原球茎分化、萌发生长和增殖同步进行，简化了组培过程，3个培养过程同时在一个培养基中进行，大大提高了繁殖效率。此外，本发明成本低、周期短、种苗质量和成活率高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种利用胚性愈伤组织进行钻喙兰人工快繁的方法。

背景技术

钻喙兰属(Rhynchostylis)为兰科(Orchidaceae)多年生附生草本，约6种，主要分布于热带亚洲，我国有2种，分别为海南钻喙兰[R.gigantea(Lindl.)Ridl.]和钻喙兰[R.retusa(L.)Bl.]，主产于南方热带地区。钻喙兰属植物花色淡雅且具芳香，花序饱满，下垂或直立，形似一条毛茸茸的狐狸尾巴，因此其商品俗称“狐尾兰”，为有较高观赏价值的一类附生兰。钻喙兰的花色较为丰富，有红、粉红、白、蓝、橘等颜色，由于其花型独特、花期长且为我国传统节日—春节前后，是极好的新春贺岁花卉，因此受到人们的极度喜爱。

钻喙兰传统繁殖方式为分株繁殖和种子繁殖，分株繁殖尽管能够保持母本性状，但效率低，增殖倍数只有1-3倍，且周期较长，难以满足工厂化生产的需要。而兰科绝大多数种类的种子细小且缺乏子叶和胚乳，导致胚发育不完全，在自然条件下需要和相关共生菌共同作用萌发，这样导致萌发时间长和萌发率低(仅为5％)、成苗率低，而且从种子萌发到能进行性状鉴定的开花植株一般需要4-5年，甚至更久。因此，需要寻求一种新的成本低、时间短、增殖系数可观，种苗质量和成活率高的无性繁殖方法来扩大钻喙兰种苗的繁殖量，进行高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。

发明内容

本发明的目的在于解决上述现有繁殖技术存在的缺陷，提供一种利用胚性愈伤组织进行钻喙兰人工快繁的方法，该方法为杂交后代人工选择育种、发展人工种植奠定了技术基础。通过本发明，亦可提供由单一原球茎产生的、基因型背景一致的优质种苗以满足人工种植的需求。

为了解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种利用胚性愈伤组织进行钻喙兰人工快繁的方法，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的蒴果剖开，其内种子接种于萌发培养基中，待愈伤组织出现后，进行胚愈伤组织诱导和增殖，原球茎分化、生长和增殖，生根培养，炼苗移栽。

进一步地，所述的利用胚性愈伤组织进行钻喙兰人工快繁的方法，包括以下步骤：

(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害的健壮植株，人工授粉后取其成熟饱满蒴果；

(2)将步骤1的蒴果进行消毒处理；

(3)种子萌发、愈伤组织诱导、原球茎发生：将经过步骤2消毒灭菌好的蒴果，在工作台上用手术刀纵向剖开，将其内种子均匀撒至下列培养基A中，所述培养基A，包括以下原料：

1/2MS基本培养液

6-苄胺基嘌呤(6-BA)

活性炭(AC)

香蕉泥

蔗糖

琼脂粉

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行种子萌发、愈伤组织诱导、原球茎发生；

(4)胚性愈伤组织增殖、原球茎发生和增殖、原球茎萌发成苗：将步骤3培养的愈伤组织转接至培养基B中，所述培养基B，包括以下原料：

1/2MS基本培养液

6-苄胺基嘌呤(6-BA)