[发明专利]一种利用胚性愈伤组织进行钻喙兰人工快繁的方法

权利要求书

1.一种利用胚性愈伤组织进行钻喙兰人工快繁的方法，其特征在于，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的蒴果剖开，其内种子接种于萌发培养基中，待愈伤组织出现后，进行胚愈伤组织诱导和增殖，原球茎分化、生长和增殖，生根培养，炼苗移栽；

具体包括以下步骤：

(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害的健壮植株，人工授粉后取其成熟饱满蒴果；

(2)将步骤1的蒴果进行消毒处理；

(3)种子萌发、愈伤组织诱导、原球茎发生：将经过步骤2消毒灭菌好的蒴果，在工作台上用手术刀纵向剖开，将其内种子均匀撒至下列培养基A中，所述培养基A，包括以下原料：

1/2MS基本培养液

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行种子萌发、愈伤组织诱导、原球茎发生；

(4)胚性愈伤组织增殖、原球茎发生和增殖、原球茎萌发成苗：将步骤3培养的愈伤组织转接至培养基B中，所述培养基B，包括以下原料：

1/2MS基本培养液

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行胚性愈伤组织增殖、原球茎发生和增殖、原球茎萌发成苗；

(5)将步骤4丛状苗切割为3-5株一丛、基部带部分愈伤组织转接入培养基C中，所述培养基C，包括以下原料：

1/2MS基本培养液

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行胚性愈伤组织增殖、原球茎发生和增殖、原球茎萌发成苗；

(6)复壮生根培养：将步骤5丛生芽中芽单株分开，选取叶子，长势基本一致的幼苗，根剪部分后接入培养基D中，所述培养基D，包括以下原料：

1/2MS基本培养液

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行复壮生根培养；

(7)炼苗和移栽：取步骤6中的生根植株置于室温下炼苗，从培养基D中取出幼苗，用清水洗净根部培养基，然后放置于室内晾干水分，待其根部发白时，移栽至用百菌清杀菌消毒过的碎松树皮中，保持湿度一段时间后，即得移栽苗。

2.根据权利要求1所述利用胚性愈伤组织进行钻喙兰人工快繁的方法，其特征在于，步骤2中所述蒴果进行消毒处理的方法为：将步骤1的蒴果先用自来水清洗表面灰尘和杂物，再用质量浓度为10％洗衣粉溶液浸泡10min并轻微震荡搅动后流水冲洗30min，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒30s，再用质量百分比为0.1％的HgCl₂灭菌20min，最后无菌水冲洗2-3次，每次不低于3min，在整个消毒过程中充分摇动器皿。