[发明专利]一种山慈菇人工快繁的新方法

权利要求书

1.一种山慈菇人工快繁的新方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体的获取：选择表型性状优良的山慈菇植株，取其假鳞茎作为外植体；

（2）将步骤（1）的假鳞茎先用自来水清洗表面泥土，再用洗衣粉溶液浸泡并震荡搅动后流水冲洗，置于工作台；接着用维生素C溶液浸泡，再接着用乙醇溶液处理，再经升汞溶液消毒，最后冲洗，得到消毒灭菌好的假鳞茎；

（3）无菌苗的获取：将经过步骤（2）消毒灭菌好的假鳞茎按芽点用手术刀切割茎段，放入A培养基中进行培养；

所述A培养基，包括以下组分：

1/2 MS基本培养液

香蕉泥 50 g/L

萘乙酸NAA 0.1 mg/L

6-苄胺基嘌呤6-BA 0.5 mg/L

活性炭AC 0.5 g/L

蔗糖 30000 mg/L

琼脂粉 5300 mg/L

所述A培养基的pH值为5.4-5.8；

（4）取步骤（3）中培养由芽点生长出来的幼芽转接入步骤（3）中的A培养基内进行增殖培养，同时在步骤（3）中发现外植体基部会产生愈伤组织，将携带有愈伤组织的幼苗切下，继续转入B培养基中进行培养；

所述B培养基，包括以下组分：

1/2 MS基本培养液

香蕉泥 80 g/L

萘乙酸NAA 1.0 mg/L

6-苄胺基嘌呤6-BA 1.5 mg/L

激动素KT 1.0 mg/L

活性炭AC 0.5 g/L

蔗糖 30000 mg/L

琼脂粉 5300 mg/L

所述B培养基的pH值为5.4-5.8；

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行培养，同步进行愈伤组织诱导，丛芽发生和增殖；接着观察发现愈伤组织开始增殖，待愈伤组织的表面出现紫色芽点，愈伤组织迅速分化出不定芽，不定芽开始分化出幼苗，并且有不定根的发生；接着将愈伤组织转接至相同的B培养基中继续增殖分化，而将获得的幼苗转入相同B培养基中继续培养，试管苗基部均有米粒大假鳞茎出现；

（5）把步骤（4）中继代培养后具米粒大小假鳞茎的单苗接种于C培养基中进行培养；

所述C培养基，包括以下组分：

1/2 MS基本培养液

香蕉泥 150 g/L

萘乙酸NAA 1.0 mg/L

活性炭AC 0.5 g/L

蔗糖 30000 mg/L

琼脂粉 5300 mg/L

所述C培养基的pH值为5.4-5.8；

控制光照度、温度、光照时间的条件下进行培养至形成完整的根系；

（6）炼苗和移栽：取步骤（5）中的生根植株置于室温下炼苗，从C培养基中取出幼苗，将残留C培养基清洗干净，放入多菌灵溶液中消毒后移栽至消毒后的基质中保温保湿培养，得移栽苗。

2.根据权利要求1所述的山慈菇人工快繁的新方法，其特征在于，步骤（2）中所述洗衣粉溶液的质量浓度为10%。

3.根据权利要求1所述的山慈菇人工快繁的新方法，其特征在于，步骤（2）中所述维生素C溶液的质量浓度为5%。

4.根据权利要求1所述的山慈菇人工快繁的新方法，其特征在于，步骤（2）中所述乙醇溶液的体积浓度为75%。

5.根据权利要求1所述的山慈菇人工快繁的新方法，其特征在于，步骤（2）中所述升汞溶液的质量浓度为0.1%。