[发明专利]一种鼠李糖脂发酵方法

权利要求书

1.一种鼠李糖脂发酵方法，其包括如下步骤：

(A)选用铜绿或恶臭假单胞菌，进行菌种活化；

(B)从活化菌种中挑取单菌落接种至种子培养基中培养得到种子液；

(C)将种子液按1-10vol％的接种量接种至发酵培养基中培养，其中，根据产物所需的单双鼠李糖脂的比例，发酵培养基选择使用不同的碳源，且发酵培养基包括微量元素，所述微量元素至少包含H₃BO₄、CuSO₄和Na₂MoO₄。

2.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述微量元素以溶液的形式与发酵培养基混合，微量元素溶液中包括H₃BO₄ 0.12-0.18g/L，CuSO₄0.065～0.085g/L和Na₂MoO₄0.03～0.07g/L，优选H₃BO₄ 0.15g/L，CuSO₄ 0.075g/L和Na₂MoO₄ 0.05g/L，微量元素溶液和发酵培养基按0.05-0.15％的比例混合。

3.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于，所述微量元素溶液中还包括ZnSO₄0.65-0.85g/L，优选约0.75g/L，MnSO₄ 1.3-1.7g/L，优选约1.5g/L。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的发酵方法，其特征在于，发酵培养基中的碳源为葡萄糖、甘油、植物油中的一种或几种作为复合碳源；所述植物油选自菜籽油、花生油、大豆油、玉米油、橄榄油、棉籽油、椰子油和棕榈油中的一种或几种。

5.根据权利要求4所述的发酵方法，其特征在于，当所需产物中单鼠李糖脂为比例高达70％以上的优势产物时，单独采用20-130g/L的橄榄油作碳源；当所需产物中双鼠李糖脂为占比60％以上的优势产物时，采用10-90g/L甘油作唯一碳源。

6.根据权利要求4所述的发酵方法，其特征在于，选用20-130g/L植物油和10-90g/L甘油作混合碳源，根据植物油种类的不同来改变单双鼠李糖脂的比例。

7.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，菌种活化包括选用一株铜绿或恶臭假单胞菌，取出冻存管后放置在37℃±1℃水浴或室温融化，接种环挑取一环接种至琼脂培养基上，30℃±1℃恒温培养箱培养12-20h，即可观察到单菌落。

8.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，种子液培养包括挑取固体平板上的单菌落接种至已经灭菌处理的种子培养基中培养15-24h。

9.根据权利要求1-8任一项所述的发酵方法，其特征在于，发酵包括将种子液按1-10％的接种量接种至发酵培养基中，自然pH条件下，28-37℃，200-400rpm，培养6-10天。

10.根据权利要求1-9任一项所述的发酵方法，其特征在于，发酵包括向发酵培养基中按0.5-1.5mL/L的比例加入微量元素溶液，灭菌处理，按1-10％的接种量将种子液接种至发酵培养基中，自然pH条件下，30-37℃，200-400rpm，培养6-10天。