[发明专利]猫疱疹病毒FHV-1的RAA恒温荧光检测引物探针组、试剂盒及方法

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，公开了一种猫疱疹病毒FHV‑1的RAA恒温荧光检测引物探针组、试剂盒及方法。本发明的引物探针组的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9，其中，所述特异性荧光探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。本发明所提供的引物探针组及试剂盒可以在等温条件下快速、方便、高效、特异地检测样本中是否含有猫疱疹病毒FHV‑1，不需要复杂仪器和专业设备，适宜于临床快速检测。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及猫疱疹病毒FHV-1的RAA恒温荧光检测引物探针组、试剂盒及方法。

背景技术

猫疱疹病毒I型(feline herpesvirus 1，FHV-1)又叫猫鼻气管炎病毒(felinerhinotracheitis virus)，属疱疹病毒科，为具有囊膜的双链DNA病毒，能在猫胚肾、肺以及睾丸细胞培养物内良好的增殖和传代。该病毒能够诱发猫鼻气管炎病，由该病毒所引发的猫鼻气管炎发病率可达100％，死亡率可达50％。该病毒可以在病猫的鼻、咽喉、气管和支气管以及舌、结膜等的部位增殖，并通过直接接触传播。该病最早从美国发现，随后在拿大、英国、荷兰、瑞士、匈牙利、越南等地发现和流行，我国已多次发现可疑病例，并分离到病毒。

现有的猫疱疹病毒I型(FHV-1)的检测方法主要包括血清学检测方法，分子生物学技术，限制性核酸内切酶分析等，其中，分子生物学技术因具有特异性强、灵敏度高等优点而越来越被人们重视。然而，分子生物学技术对精密设备高度依赖，尤其是荧光定量PCR仪，这使得病毒的检测主要集中在实验室内，操作复杂且耗时较长，同时结果的判读也都需要受过专业训练的技术人员才能完成。因此，亟需要建立了一种快速方便、准确可靠的猫疱疹病毒FHV-1的检测方法。

发明内容

基于上述背景介绍，本发明的目的是提供一种猫疱疹病毒FHV-1的RAA恒温荧光检测引物探针组、试剂盒及方法。

作为本发明的第一方面，本发明提供一种猫疱疹病毒FHV-1的RAA恒温荧光检测引物探针组。

作为优选，所述引物探针组的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9，其中，所述特异性荧光探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

作为优选，所述特异性荧光探针的荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas Red或LC RED460中的一种，荧光淬灭基因选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1或Tamra中的一种。

作为本发明的第二方面，本发明提供一种猫疱疹病毒FHV-1的RAA恒温荧光检测试剂盒。

作为优选，所述试剂盒包括猫疱疹病毒FHV-1的RAA恒温荧光检测引物探针组，其中，所述引物探针组的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9，其中，所述特异性荧光探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

作为优选，所述特异性荧光探针的荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas Red或LC RED460中的一种，荧光淬灭基因选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1或Tamra中的一种。

作为优选，所述试剂盒还包括A Buffer、B Buffer、RAA干粉试剂、猫疱疹病毒FHV-1标准品和ddH2O中至少一种。

作为优选，所述A Buffer为20％PEG，B Buffer为280mM MgAc。