[发明专利]猫疱疹病毒FHV-1的RAA恒温荧光检测引物探针组、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201910856913.6 | 申请日： | 2019-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN110564895A | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 黄震巨;李沛;滕丽琼;孙文博;张传美;李阳 | 申请（专利权）人： | 南宁众册生物科技有限公司;山东省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 33283 杭州天昊专利代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 向庆宁 |
| 地址： | 530000 广西壮族自治区南宁市大学西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核苷酸序列 引物探针 特异性荧光探针 疱疹病毒 试剂盒 分子生物学技术 荧光报告基团 荧光淬灭基团 等温条件 反向引物 复杂仪器 快速检测 荧光检测 正向引物 专业设备 样本 检测 | ||
1.一种猫疱疹病毒FHV-1的RAA恒温荧光检测引物探针组，其特征在于，所述引物探针组的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9，其中，所述特异性荧光探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。
2.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述特异性荧光探针的荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas Red或LC RED460中的一种，荧光淬灭基因选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1或Tamra中的一种。
3.一种猫疱疹病毒FHV-1的RAA恒温荧光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物探针组。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括A Buffer、B Buffer、RAA干粉试剂、猫疱疹病毒FHV-1标准品和ddH2O中至少一种。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述A Buffer为20％PEG，B Buffer为280mM MgAc。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的RAA干粉试剂的成分如下：1mmol/L dNTP、90ng/μL SSB蛋白、120ng/μLrecA重组酶蛋白或30ng/μL Rad51、30ng/μLBsu DNA聚合酶，100mmol/L Tricine、20％PEG、5mmol/L二硫苏糖醇、100ng/μL肌酸激酶、Exo核酸外切酶。
7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述猫疱疹病毒FHV-1标准品为含有猫疱疹病毒FHV-1保守区基因部分序列的阳性质粒。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述含有猫疱疹病毒FHV-1保守区基因部分序列的阳性质粒如SEQ ID NO.13所示。
9.一种猫疱疹病毒FHV-1的RAA恒温荧光检测方法，其特征在于，包括如下步骤：提取待测样本的DNA，以待测样本的DNA为模板，采用如权利要求3～8任一项所述的试剂盒进行实时荧光RAA反应，根据实时荧光RAA扩增曲线分析待测样本，确定待测样本是否含有猫疱疹病毒FHV-1。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述实时荧光RAA反应程序为：39℃，1min；39℃，30s，共计40个循环。
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