[发明专利]一种用于定量测定粪便中幽门螺杆菌抗原试剂的制备方法

说明书

本发明首次利用将单克隆抗体结合到乳胶增强免疫比浊法中，用于人粪便中幽门螺杆菌抗原尿素酶的检测，用于诊断幽门螺杆菌的感染，与现有技术相比，本申请采用特异性识别幽门螺杆菌抗原尿素酶的单抗，显著提高了检测灵敏度和特异性，具有一定的临床应用前景。

技术领域

本发明属于医疗检测方法技术领域，涉及一种快速定量测定粪便中幽门螺杆菌抗原的方法，具体地说涉及一种乳胶免疫比浊法快速定量测定粪便中幽门螺杆菌抗原的试剂的制备方法。

背景技术

大量研究表明，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎、消化性溃疡的重要病因，且与胃癌、胃粘膜相关淋巴样组织淋巴瘤密切相关。目前，临床上已有多种方法评价Hp感染与否，主要分为两大类：侵入性和非侵入性检测方法。

其中，侵入性检测方法是使用内窥镜取得胃活检组织后进行检测，一般包括脲酶试验法、病理学检测法及细菌培养法。快速脲酶试验法依据幽门螺杆菌具有丰富的可分解尿素的尿素酶，尿素酶可分解尿素产生氨气，通过pH的变化测定幽门螺杆菌，该方法简便迅速，但是存在准确度不足的问题，可能因含尿素酶的其它细菌存在而产生假阳性或者检测近期试用过降低胃部细菌量或直接抑制尿素酶活性的药物的样品可产生假阴性。病理学检测法通过对胃粘膜组织切片染色检查，可直接显示幽门螺杆菌菌体而证实，但是不同病理学家观察的差异性对于胃萎缩样品的诊断具有一定的困难性。细菌培养法通过取胃粘膜组织做幽门螺杆菌培养，但是存在培养细菌较少、操作过程复杂、费用昂贵的问题。另外，侵入性检测方法还存在内窥镜侵入待检测者体内导致待检测者痛苦或易产生感染的问题。

非侵入性检测方法指不通过胃镜取活检标本诊断幽门螺杆菌标本感染的方法。这类方法包括血清抗体检测、13C/14C呼气试验等。血清抗体检测目前已有的方法包括酶联免疫法、免疫印迹法、胶体金法等，但是由于根除幽门螺杆菌后人体血清中仍然含有对应的抗体，因此通过血清抗体来判定幽门螺杆菌感染存在特异性问题，不能真实反映出胃部是否还有幽门螺杆菌存在。13C/14C呼气试验作为一种检测幽门螺杆菌感染的方法，在临床上广泛应用，但是存在放射性问题，同时需要专门的设备，因此在家庭和社康中心的应用就受到很大限制。

当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。这一方法早于1959年Schultre和Schuick等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射。但是经典的免疫比浊法，少量的小的抗原抗体复合物极难形成浊度，除非放置较长时间:如形成较大的复合物，则抗原和抗体用量也较大，显然不符合微量化的要求。于是发展了现在广泛应用于生化分析仪的乳胶增强免疫比浊法(PETIA)。其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。

乳胶增强免疫比浊法(Latex-enhanced tμrbidimetric immμnoassay)是一种体液蛋白均相透射免疫比浊检测方法，原理是在纳米级高分子乳胶微球的表面交联单克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的透光性能；反应液透光性能(即吸光度)的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。其具有如下优点：1、省时省力：在均相反应体系中进行抗原、抗体反应，利用全自动生化分析仪直接测定反应液的吸光度值，几分钟就能获得结果，省却酶联免疫法反复孵育和洗板等烦琐操作步骤；2、稳定准确：操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测人体血液或粪便排泄物中幽门螺杆菌尿素酶抗原的含量；3、应用广泛：乳胶增强免疫比浊法的灵敏度足以检测到幽门螺杆菌尿素酶抗原的下限值，可完全满足临床检测要求，明显优于免疫层析法(胶体金)。