[发明专利]一种荧光增强型双色可视化毒品检测探针及其制备方法

权利要求书

1.一种荧光增强型双色可视化毒品检测探针，其特征在于：所述检测探针是由聚多巴胺纳米球和在单一激发光下发射不同颜色荧光的两种铜纳米团簇组成，在两种铜纳米团簇表面分别修饰有甲基苯丙胺单克隆抗体和氯胺酮单克隆抗体；

两种铜纳米团簇分别为在365nm激发光下发射出中心波长为450nm的蓝色荧光的铜纳米团簇，和在365nm激发光下发射出中心波长为600nm的橙色荧光的铜纳米团簇；

所述聚多巴胺纳米球的粒子直径为100-500nm；所述铜纳米团簇的粒子直径为0.5-5nm；

所述检测探针中，两种铜纳米团簇的质量比为1:1，聚多巴胺纳米球的质量与两种铜纳米团簇的总质量的比为1:5-25。

2.一种权利要求1所述荧光增强型双色可视化毒品检测探针的制备方法，其特征在于：

(1)合成聚多巴胺纳米球、发射蓝色荧光的铜纳米团簇和发射橙色荧光的铜纳米团簇；

(2)将浓度为0.9-3.8mg/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和浓度为1.1-4.3mg/L的N-羟基琥珀酰亚胺钠盐的水溶液，按体积比1:1进行混合，之后加入甲基苯丙胺或氯胺酮单克隆抗体，在37℃下持续搅拌0.5-2小时，获得备用抗体溶液；在所述备用抗体溶液中抗体浓度范围在50-200μM；

将发射蓝色荧光的铜纳米团簇和发射橙色荧光的铜纳米团簇分别分散在水中，获得浓度为0.95-3.8mg/mL的分散液；

然后在一种备用抗体溶液中按体积比1:1-5加入发射蓝色荧光的铜纳米团簇的分散液，在另一种备用抗体溶液中按体积比1:1-5加入发射橙色荧光的铜纳米团簇的分散液，再在37℃下孵化3-6小时，即完成铜纳米团簇表面抗体的修饰，分别获得修饰后蓝光铜纳米团簇的分散液和修饰后橙光铜纳米团簇的分散液；

(3)按照两种铜纳米团簇的质量比为1:1、聚多巴胺纳米球的质量与两种铜纳米团簇的总质量的比为1:5-25，将所述修饰后蓝光铜纳米团簇的分散液和所述修饰后橙光铜纳米团簇的分散液混合后，再加入聚多巴胺纳米球，均匀混合30-90s，即获得荧光增强型双色可视化毒品检测探针。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

所述聚多巴胺纳米球的合成方法为：将0.05-0.3g的盐酸多巴胺，加入到50-500mLTris缓冲液和乙醇或异丙醇的混合溶液中，搅拌12-72小时；反应完成后，离心、洗涤、干燥，即获得聚多巴胺纳米球粉末；在所述混合溶液中，Tris缓冲液的浓度为2-20mM；

所述发射橙色荧光的铜纳米团簇的合成方法为：将200-500mmol铜盐和1-25mol含有羧基官能团的表面配体在6-16mL超纯水中混合，用碱性物质调节pH至3-5，获得混合液；按照混合液与不良溶剂的体积比为1:25-95，向混合液中加入不良溶剂，然后离心，所得沉淀真空干燥后，即获得发射橙色荧光的铜纳米团簇粉末；

所述发射蓝色荧光的铜纳米团簇的合成方法为：将0.1-1g的分子量40000的聚乙烯吡咯烷酮、0.025-0.4μmol铜盐和0.25-4μmol还原剂，在5-20mL超纯水中混合，用碱性物质调节pH至6-8范围内；所得混合液在室温下用截留分子量为15000的透析袋透析反应24-72h；在所得透析液中加入0.05-4μmol的还原剂，再用酸性物质调节pH至3-5范围内，室温下孵化3-5天，随后用截留分子量为15000的透析袋进行透析反应24-72h；对所得溶液进行离心，收集沉淀，经真空干燥后，得到发射蓝色荧光的铜纳米团簇粉末。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述铜盐为硫酸铜、硝酸铜、氯化铜、醋酸铜或氰化亚铜；

所述含有羧基官能团的表面配体为谷胱甘肽、半胱氨酸、巯基乙酸、巯基丙酸、对巯基苯甲酸或甘氨酸；

所述还原剂为水合肼、硼氢化钠、氰基硼氢化钠、柠檬酸钠或抗坏血酸；

所述碱性物质为氢氧化钠或氢氧化钾；

所述不良溶剂为乙醇、异丙醇或丙醇；

所述酸性物质为盐酸或硫酸。