[发明专利]一种猪伪狂犬病病毒基因缺失毒株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一株猪伪狂犬病毒（pseudorabies virus）变异强毒株，命名为PRV HNxy，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCC No. 17696。

2.一株猪伪狂犬病病毒变异株的基因缺失毒株，所述猪伪狂犬病病毒变异株的基因缺失毒株名称为HNxy-ΔgIgE，该毒株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心保藏，保藏编号为CGMCC No. 16900。

3.权利要求2所述的猪伪狂犬病病毒变异株HNxy株的基因缺失毒株的构建方法，其特征在于，该毒株的构建步骤为：

(1)转移质粒的构建，以pCloneEZ载体为骨架载体，构建转移载体：在pCloneEZ载体中插入权利要求1所述的猪伪狂犬病病毒变异株PRV HNxy株基因组中gI基因缺失位点之前的部分序列作为左同源臂、US2基因缺失位点之后的部分序列作为右同源臂，左右同源臂间插入EGFP基因表达框；

(2)表达Cre重组酶的真核表达质粒pCDNA3.1-Cre的构建，以pCDNA3.1载体为骨架载体，插入重组酶Cre的表达框；

(3)绿色荧光标记的缺失病毒的构建，转移载体pCloneEZ-gI-EGFP-US2转染经亲本HNxy病毒感染的Vero细胞，通过蚀斑筛选，获得表达绿色荧光蛋白的缺失病毒PRV HNxy-ΔgIgE-EGFP；

(4)猪伪狂犬病病毒变异株HNxy株的基因缺失毒株的构建，表达Cre重组酶的真核表达质粒pCDNA3.1-Cre转染经缺失病毒PRV HNxy-ΔgIgE-EGFP感染的PK-15细胞，通过蚀斑筛选，获得HNxy变异株缺失病毒PRV HNxy-ΔgIgE；

所述步骤（1）中，所述左同源臂的序列为序列表中序列5，所述右同源臂的序列为序列表中序列6。

4.一种疫苗组合物，其特征在于，由权利要求2所述的猪伪狂犬病病毒基因缺失疫苗株和药学上可接受的佐剂组成。

5.权利要求2所述的猪伪狂犬病病毒基因缺失疫苗株在制备预防猪伪狂犬病疫苗中的应用。

6.权利要求2所述的猪伪狂犬病病毒基因缺失疫苗株在制备诊断或检测猪伪狂犬病试剂中的应用。