[发明专利]一种HYML-122血药浓度定量分析方法

权利要求书

1.一种HYML-122血药浓度定量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：用HYML-122标准品和空白生物基质配制标准曲线样品，采用内标物工作液沉淀后，采用UPLC-MS/MS法检测，进样并绘制标准曲线获得回归方程，取待测血浆采用内标物工作液沉淀后按同样方法处理，采用回归方程计算HYML-122的血药浓度；

其中，UPLC-MS/MS法的高效液相色谱条件为：色谱柱为ACE Excel 1.7μm C18-AR色谱柱；流动相A为pH＝2.0-6.5的体积分数为0.01-0.2％甲酸水溶液，流动相B为甲醇；流速为0.45-0.55mL/min；柱温为35-45℃；进行梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为：0-1.3min内，维持流动相A和流动相B的体积比为30：70；1.3-1.5min内，流动相A和流动相B体积比从30：70渐变为100％流动相B；1.5-2min内，维持100％流动相B；2.01-2.5min内，流动相A和流动相B维持体积比为30：70；

UPLC-MS/MS法的质谱条件为：离子源为ESI离子源；检测方式为正离子检测；扫描方式为多反应监测MRM；接口电压为0.5-4kV；接口温度为250-375℃；DL温度为200-300℃；加热块温度为400℃；雾化气流量为3L/min；加热气流量为10L/min；干燥气流量为10L/min；

其中，高效液相色谱条件中，色谱柱的规格为50mm×2.0mm，粒径为1.7μm；

其中，所述空白生物基质为健康的人或动物的全血经EDTA-K2抗凝、分离后的血浆，于-80℃冰箱保存，临用前在室温条件下自然解冻即得；

其中，所述待测血浆为口服或静脉给予HYML-122制剂后的人或动物的全血经EDTA-K2抗凝、分离后的血浆，于-80℃冰箱保存待测，临用前在室温条件下自然解冻即得。

2.根据权利要求1所述的HYML-122血药浓度定量分析方法，其特征在于，高效液相色谱条件中，采用氨水调节流动相A的pH。

3.根据权利要求1或2所述的HYML-122血药浓度定量分析方法，其特征在于，高效液相色谱条件中，进样量为5-20μL。

4.根据权利要求1或2所述的HYML-122血药浓度定量分析方法，其特征在于，所述内标物工作液中的内标物为地塞米松。

5.根据权利要求1或2所述的HYML-122血药浓度定量分析方法，其特征在于，所述标准曲线样品或待测血浆的处理方法为：取标准曲线样品或待测血浆20μL于96孔样品板中，加入400μL内标物工作液，涡旋5min，3000g、4℃下离心15min，取上清液200μL，加入200μL水，混匀后进样进行LC-MS/MS分析。

6.根据权利要求1或2所述的HYML-122血药浓度定量分析方法，其特征在于，所述内标物工作液的配制如下：称取内标物地塞米松标准品10.000mg于玻璃样品瓶中，加入甲醇，溶解，配制浓度为1.000mg/mL的内标储备液；然后取适量内标储备液，以甲醇稀释，配制内标物工作液。

7.根据权利要求1或2所述的HYML-122血药浓度定量分析方法，其特征在于，所述内标物工作液的浓度为400ng/mL。