[发明专利]鉴别复原乳和超高温灭菌乳的方法

权利要求书

1.鉴别复原乳和超高温灭菌乳的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

a)采用高效液相色谱-高分辨质谱分别采集复原乳和超高温灭菌乳的乳样的非靶向代谢组学数据，并分别在两者的非靶向代谢组学数据中提取两者的特征信息；

b)建立分析模型，并对所述特征信息进行分析，确定所述复原乳和所述超高温灭菌乳的差异性代谢物；

c)构建鉴别所述复原乳与所述超高温灭菌乳的拟靶向代谢组学检测方法以筛查步骤b)中所述差异性代谢物，获得所述差异性代谢物的特征信息；

d)基于步骤c)中获得的所述差异性代谢物的特征信息，构建PCA-Class判别分析模型，并基于所述PCA-Class判别分析模型实现对待测乳样的判定；

其中，所述步骤a)中，采用所述高分辨质谱采集数据的条件包括：

采集模式为数据关联采集模式；

采用电喷雾离子源，数据采集范围m/z为50Da～1000Da；

正离子模式下，喷雾电压为5500V，去簇电压为70V；

负离子模式下，喷雾电压为-4500V，去簇电压为-70V；

气帘气压力为30Psi；喷雾气压为45Psi；加热辅助气压力为65Psi；离子源温度为550℃；碰撞能为35±15eV；

步骤a)中，采用高效液相色谱采集数据的条件包括：色谱柱为3.0mm×150mm，1.8μm的C18色谱柱；

正离子模式下：流动相A和B分别为0.1％甲酸-水和0.1％甲酸-乙腈溶液，流动相B梯度为0min，2％；5min，2％；8min，10％；12min，95％；18min，95％；18.1min，100％；平衡1.9min，流速0.4mL/min，进样量为5μL，柱温40℃；

负离子模式下：流动相A和B分别为5mM乙酸胺-水和5mM乙酸胺-乙腈溶液，流动相B梯度为0min，2％；5min，2％；8min，10％；12min，95％；16min，95％；16.1min，100％；平衡1.9min，流速0.4mL/min，进样量为5μL，柱温40℃；

步骤a)中，所述复原乳和所述超高温灭菌乳经过前处理，所述前处理具体包括：

取超高温灭菌乳和复原乳各2mL，在8000rpm下离心30min，除去分子量大的脂类物质；分离出下层溶液，取1mL，加入2mL乙腈，涡旋5min，沉淀蛋白质；然后在10000rpm下离心10min，分离上层溶液，以0.22μm的微孔过滤膜过滤；

步骤c)中，正离子模式下筛查出的所述差异性代谢物如表1所示；

负离子模式下筛查出的所述差异性代谢物如表2所示；

表1 正离子模式下所述差异性代谢物的质谱信息；

表2 负离子模式下所述差异性代谢物的质谱信息；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述高分辨质谱为高分辨飞行时间质谱。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中，在提取特征信息之前，还包括对所述非靶向代谢组学数据进行预处理的步骤；

所述预处理包括：进行噪音过滤及基线校正后，对色谱峰进行提取、对齐、标准化和归一化。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述色谱峰的提取范围为50Da～1000Da；质量宽度为0.01Da～0.03Da。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述质量宽度为0.02Da。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤a)中，当所述色谱峰的强度100或者信噪比3时，不进行提取。

7.根据权利要求1或3-6任一项所述的方法，其特征在于，提取所述特征信息的过程包括：

将经预处理的色谱峰数据中缺失值50％的特征信息剔除，剩余缺失值以该特征信息最小值的1/2计算，进行缺失值填充；

将相对标准偏差20％的特征信息剔除，并对色谱峰数据进行标准化处理，提取特征信息。