[发明专利]血浆外泌体tRFs标志物及其在乳腺癌诊断中的应用

权利要求书

1.一种血浆外泌体tRFs标志物，其特征在于，标志物是外泌体来源的tRF-Ser-AGA-018。

2.权利要求1所述的血浆tRFs标志物在乳腺癌诊断中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于包括：

A.建立统一标准的标本库和数据库，以标准操作程序采集符合标准的血液样本和组织样本，系统收集完整的纳入人群的临床资料；

B.血液中肿瘤源性外泌体来源的tRFs差异表达谱分析，选择乳腺癌病例和健康人的血浆样本，以及乳腺癌癌组织和癌旁组织，提取外泌体，进行tRFs和tiRNA测序，筛选出差异表达的tRFs；

C.对已筛选的差异表达tRFs在大样本人群中进行QRT-PCR定量分析。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述步骤A具体的操作步骤：

(1)纳入样品的包括384名女性患者(284名乳腺癌，100名乳腺纤维腺瘤)外周血、肿瘤组织、癌旁组织和60名健康者外周血，她们被分为5组，具体分组如下：

组1：发生乳腺癌淋巴转移的病人，收集每位患者组织和外周血，收集每位患者淋巴结和原发肿瘤标本、癌旁组织，样品在切除后立即快速冷冻，外周血在3-4个时间点(肿瘤切除前的术中、术后7d，术后化疗完成后2d、转移)采集；

组2：体检健康者外周血；

组3：乳腺纤维腺瘤病人：收集每位患者组织和外周血，收集每位患者乳腺纤维腺瘤标本、乳腺纤维腺瘤旁组织，样品在切除后立即快速冷冻，外周血在两个时间点(乳腺纤维腺瘤切除前的术中和术后7d)采集；

组4：乳腺癌原位癌患者：收集每位患者组织和外周血，收集每位患者肿瘤组织、癌旁组织，样品在切除后立即快速冷冻，外周血在三个时间点(肿瘤切除前的术中、术后7d，术后化疗)采集；

组5：其他常见癌症：收集每位患者原发肿瘤(卵巢癌、子宫颈癌、肝癌、肺癌)外周血；

(2)外周血的血浆分离：取外周血，1900rpm离心10min，然后小心吸取浅黄色上清，6mL外周血可以收集约2mL血浆，在4℃条件下，16000rpm离心10min，然后将血浆分装至2mL的无核酸的EP管中，液氮保存直到使用；

(3)将组织样品样品冷冻并保持在液氮中；

(4)记录BC患者的临床病理特征，包括年龄、职业、种族、月经和生殖功能，临床TNM分期，病理诊断，分子亚型和化疗策略，使用肿瘤、淋巴结、转移(TNM)系统(AJCC第7版)对临床病理学因素和临床分期进行分类。