[发明专利]桃果实低酸或酸性状相关的SNP分子标记及其应用有效
| 申请号： | 201910836010.1 | 申请日： | 2019-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN110512024B | 公开（公告）日： | 2022-03-18 |
| 发明（设计）人： | 徐摇光;谢华;于洋;官健涛;任飞 | 申请（专利权）人： | 北京市农林科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京商专永信知识产权代理事务所(普通合伙) 11400 | 代理人： | 欧阳石文 |
| 地址： | 100097 北京市海淀区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 果实 酸性 相关 snp 分子 标记 及其 应用 | ||
1.一种检测桃果实低酸或酸性状的SNP分子标记的试剂在鉴定待测桃树的果实为酸性状还是低酸性状中的应用，其特征在于：所述SNP分子标记来自
其中，当检测到该基因第1827位的碱基表明为纯合CC基因型或杂合CT基因型时，判定果实为低酸性状；当检测到所述位点为纯合TT基因型时，果实为酸性状，所述酸性状标准为待测桃树的果实样品pH≤4.0，低酸性状标准为待测桃树的果实样品pH4.0。
2.一种通过检测SNP分子标记的基因型以检测桃树的果实低酸或酸性状的方法，其特征在于：所述SNP分子标记来自
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，将所述方法用于果实为低酸风味的桃品种的早期预测，或者用于果实为低酸风味的桃品种资源的鉴定，或者用于果实为低酸风味的桃优异单株的选育。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，采用PCR扩增和测序来检测所述SNP分子标记的基因型。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，采用KASP检测所述SNP分子标记的基因型。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，采用KASP引物组合，包括上游两条正向引物：连接荧光标记Fam的P1引物和连接荧光标记Hex的P2引物，以及下游一条反向引物为P3引物，其中各引物序列如下：
P1: AGATTGTTTTCATCAAGAGCTTCCATC；
P2: CAGATTGTTTTCATCAAGAGCTTCCATT；
P3:TGAATGCACCACCATACTCAATCAGTTAT。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述KASP引物用无菌水溶解并稀释至10 μM，按照P1：P2：P3 =12：12：30比例混合备用。
8.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述KASP的PCR反应体系如下：
PCR反应体系以3 μL计为：DNA样品 1 μL、2×KASP Master mix1 μL、KASP 引物混合物1μL；
所述PCR反应参数为：94 ℃15 min，然后94 ℃20 sec、61-55 ℃60 sec循环10次，每个循环下降0.6 ℃，再于94 ℃20 sec、55 ℃60 sec循环27次。
9.一种用于KASP检测桃果实低酸或酸性状的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括KASP引物组合，包括上游两条正向引物：连接荧光标记Fam的P1引物和连接荧光标记Hex的P2引物，以及下游一条反向引物为P3引物，其中各引物序列如下：
P1: AGATTGTTTTCATCAAGAGCTTCCATC；
P2: CAGATTGTTTTCATCAAGAGCTTCCATT；
P3:TGAATGCACCACCATACTCAATCAGTTAT；
其中，所述酸性状标准为待测桃树的果实样品pH≤4.0，低酸性状标准为待测桃树的果实样品pH4.0。
10.如权利要求9所述的用于KASP检测桃果实低酸或酸性状的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括KASP Master mix。
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