[发明专利]一种利用ARMS-PCR技术检测甲基化水平的方法及其引物和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测甲基化水平的引物，其特征在于，所述引物包括若干组分别与CpG位点一一对应的引物；每组引物包括两条位于CpG位点上游的特异性引物和一条位于CpG位点下游的通用引物；或两条位于CpG位点下游的特异性引物和一条位于CpG位点上游的通用引物；

所述特异性引物的3’端末端碱基分别与CpG位点的甲基化和未甲基化保持一致，每条特异性引物的3’端倒数第二或第三位碱基上引入错配碱基，且每组引物中的每条特异性引物具有不同的荧光标记；

所述引物具体序列如SEQ ID NO.1~69所示。

2.根据权利要求1所述的用于检测甲基化水平的引物，其特征在于，所述CpG位点为能够利用生物信息学检索方法确认的体液特异性CpG位点。

3.根据权利要求2所述的用于检测甲基化水平的引物，其特征在于，所述CpG位点为USP49上的CpG位点、cg26763284、cg17610929、cg23521140、cg05261336、cg05656364-283d、cg22407458-288d、cg17621389、cg09696411、cg25416153、cg09765089-CVF2、cg08792630、cg06379435-VB1、cg06379435-VB2、cg01607849 、cg26285698、cg16732616、cg21597595、cg26107890、cg15731815、cg09652652-2d、cg05761971、cg09765089-CVF1。

4.一种利用ARMS-PCR技术检测法医学体液检材甲基化水平的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取待测样本DNA，并用亚硫酸氢盐对其进行处理；

（2）利用权利要求3所述的位点和引物建立复合引物；所述复合引物为Panel A-M、Panel A-UM、Panel B-M和Panel B-UM；再利用上述复合引物对步骤（1）处理后的DNA片段进行ARMS-PCR，然后根据检测所得甲基化水平，即可判断该样本属于何种类型的法医学体液；

所述Panel A-M由如SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ IDNO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ IDNO.31、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ IDNO.26、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.64、SEQ ID NO.66、SEQ IDNO.13和SEQ ID NO.15所示的引物组成；

所述Panel A-UM由如SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQID NO.40、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21、SEQID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ IDNO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.64、SEQ ID NO.65、SEQ IDNO.14和SEQ ID NO.15所示的引物组成；

所述Panel B-M由如SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQID NO.61、SEQ ID NO.63、SEQ ID NO.67、SEQ ID NO.69、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57、SEQID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23、SEQID NO.58、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.28和SEQ ID NO.30所示的引物组成；

所述Panel B-UM由如SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17、SEQID NO.61、SEQ ID NO.62、SEQ ID NO.68、SEQ ID NO.69、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.56、SEQID NO.49、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQID NO.58、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.28和SEQ ID NO.29所示的引物组成。