[发明专利]一种南极磷虾油中磷脂的检测方法

权利要求书

1.一种南极磷虾油中磷脂的检测方法，其特征在于它包括以下步骤:

（1）样品溶解：准确称取50mg磷虾油，加入3ml色谱纯氯仿，涡旋混合。

（2）样品净化：取氨基固相萃取柱（1000 mg/6 ml）先用5ml氯仿活化，然后将溶解后的磷虾油试样移入固相萃取柱中上样，依次用15ml的氯仿-异丙醇溶液（2:1），10ml乙醚-乙酸溶液（72:1），15ml甲醇溶液洗脱，收集甲醇洗脱液，洗脱液用旋转蒸发在35℃条件下浓缩近干，然后加入正己烷-异丙醇（2:3）溶解定容至10 mL，10000 r/min 离心5分钟后过0.45 μm有机滤膜用于色谱分析。

（3）液相色谱-蒸发光检测器测定：在优化的色谱条件下，将三种磷脂的混合标准溶液和样品待测液进样依次测定，根据标准品的保留时间确定样品中的磷脂组分，以标准溶液中各组分色谱峰面积为横坐标，各组分的质量浓度为纵坐标进行回归分析，将样品溶液的峰面积代入乘幂回归方程，从而获得样品中目标物的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（2）取氨基固相萃取柱用氯仿活化上样后，依次用15ml的氯仿-异丙醇溶液（2:1），10ml乙醚-乙酸溶液（72:1），15ml甲醇溶液洗脱，收集甲醇洗脱液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（2）中对洗脱液进行浓缩时旋转蒸发温度为35℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（3）中优化的色谱条件为：Chromolith Performance-Si正相整体硅胶色谱柱4.6 mm×100mm；柱温：25℃；流速：1.5mL/min；载气压力：40 psi；漂移管温度：55 ℃；进样量：10 µL；流动相：A为正己烷（含0.04%三乙胺），B为异丙醇C 为13%乙酸水溶液；洗脱梯度：0~0.5min，40% A, 57%B, 3%C；0.5~8.0min，40% A, 50%B, 10%C；8.0~12.0 min，40% A, 50%B, 10%C。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（3）中各标准品的浓度范围分别为：PE（10~180 μg/mL）、PC（30~540 μg/mL）及LPC（20~360 μg/mL）。以磷脂浓度为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标，按y=ax^b对标准曲线进行拟合，分别得到3种磷脂的乘幂曲线方程。