[发明专利]一种根癌农杆菌介导的桃熏草莓遗传转化方法

说明书

本发明公开了一种根癌农杆菌介导的桃熏草莓遗传转化方法，包括：采用桃熏草莓匍匐茎茎尖培育桃熏草莓组培苗，切割叶块进行预培养，得预培叶片；制备根癌农杆菌溶液，并将预培叶片和根癌农杆菌溶液进行转化共培养，经延迟筛选并筛选培养后进行荧光检测和PCR鉴定。本发明的转化方法利用根癌农杆菌介导，通过桃熏草莓离体再生体系建立、转化体系建立、转化植株细胞水平鉴定和分子水平鉴定的遗传转化过程，建立十倍体桃熏草莓遗传转化体系，为今后针对桃熏草莓的遗传改良基因工程奠定基础。

技术领域

本发明属于遗传工程技术领域，具体涉及一种根癌农杆菌介导的桃熏草莓遗传转化方法。

背景技术

草莓(Fragaria×ananassa)属蔷薇科草莓属多年生草本植物，是重要的鲜食水果作物之一，也是蔷薇科植物重要的功能基因研究的模式物种。草莓营养价值极其丰富，被誉为“水果皇后”，是果糖、葡萄糖、维生素A、钾、钙和磷等矿物质的良好来源，尤其是维生素C，其含量比葡萄、苹果高出7～10倍，胡萝卜素、钙、磷、铁的含量也比苹果、梨、葡萄高3～4倍。已经证明了草莓提取物具有防癌作用，同时草莓可使血管内皮脂质过氧化和丙二醛形成减少。

由于草莓染色体的多倍性和高度杂合性，使传统育种受到了有益性状定向改良难、育种范围窄、耗时长等限制。现代基因工程直接在基因水平上改良，并打破了物种间的界限，在培育抗病、抗逆境、抗虫和抗除草剂等草莓优良品种中发挥越来越重要的作用。草莓基因工程的真正开始是1990年以Jame与Nehra相继获得的草莓转基因植株为标志的，之后多种有价值的外源目的基因相继被转入草莓中。2006年草莓被列为蔷薇科基因组学研究模式植物之一，随着分子生物学研究的不断发展，基于不定芽再生的遗传转化成为了草莓育种的重要途径。通过基因工程，可以获得常规育种无法获得的新资源。

桃熏(Tokun)，果皮果肉白色，微带粉色，有浓浓的水蜜桃香味，充分成熟后为淡黄色；可溶性固形物(糖度)14％以上，口感香甜，入口即化，色泽、味道异于常见品种，由于其独特的水蜜桃味口感及醒目的白色果皮，一上市便引起人们的喜爱，丰富草莓品种结构，满足大众的多样化需求。但是，桃熏草莓对白粉病、灰霉病的抗性上比章姬略差，因此基于桃熏草莓高效的离体再生体系及农杆菌介导的遗传转化体系的成功建立，为今后针对桃熏草莓的基因工程具有重要意义。

发明内容

本发明解决的技术问题在于为通过基因工程克服现有桃熏草莓性状缺陷，提供一种根癌农杆菌介导的桃熏草莓遗传转化方法，利用根癌农杆菌介导，通过包括桃熏草莓离体再生体系建立、转化体系建立、转化植株细胞水平鉴定和分子水平鉴定的遗传转化过程建立一种十倍体桃熏草莓遗传转化体系。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

一种根癌农杆菌介导的桃熏草莓遗传转化方法，包括如下步骤：

(1)培育桃熏草莓组培苗，和

(2)由步骤(1)所得组培苗准备受体材料，切割叶块进行预培养，得预培叶片；和

(3)制备根癌农杆菌溶液；和

(4)步骤(2)所述预培叶片和步骤(3)所述根癌农杆菌溶液进行转化共培养，得初始转化材料；和

(5)步骤(4)所得初始转化材料延迟筛选，并筛选培养，得转化桃熏草莓芽苗；和/或

(6)荧光检测和PCR鉴定步骤(5)所得阳性转化桃熏草莓。

本发明上述技术方案的具体方法如下所述。