[发明专利]一种基于间充质干细胞的融合癌细胞膜仿生纳米粒及其制备方法

权利要求书

1.一种基于间充质干细胞的融合癌细胞膜仿生纳米粒，其特征在于，所述的仿生纳米粒为载药纳米粒（简称TB@NP），由一层融合细胞膜包覆，融合膜由间充质干细胞膜和癌细胞膜组成，制成可靶向肿瘤及肿瘤骨转移部位的仿生纳米递药系统。

2.按权利要求1所述的基于间充质干细胞的融合癌细胞膜仿生纳米粒，其特征在于，所述的间充质干细胞提取自小鼠或大鼠的骨髓、胚胎或脐带，采用淋巴分离液、贴壁分离法、红细胞裂解法、流式分选法、免疫磁珠法及percoll分层液密度梯度离心分离纯化制得。

3.按权利要求1所述的基于间充质干细胞的融合癌细胞膜仿生纳米粒，其特征在于，所述的融合的癌细胞膜来源于任一种具有骨转移潜能的癌症，所述癌症选自前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，肾癌，肺癌，肝癌，宫颈癌或直肠癌。

4.按权利要求1-3任一所述的基于间充质干细胞的融合癌细胞膜仿生纳米粒，其特征在于，所述的间充质干细胞膜和癌细胞膜通过下述方法制备：培养的间充质干细胞和癌细胞通过细胞刮收集，重悬于4℃预冷的pH7.4的TM缓冲液中，经挤出器挤出，超声后，离心去除细胞内容物，收集上清继续离心，得沉淀，用TM缓冲液洗并重悬，再离心，得细胞膜沉淀，-80℃冰箱备用。

5.按权利要求1所述的基于间充质干细胞的融合癌细胞膜仿生纳米粒，其特征在于，所述的纳米粒作为内核，其为无机纳米粒或有机纳米粒，选自硫辛酸纳米粒（LA-NP）或硫辛酸-细胞内化肽6聚合物（LACLss）或硫辛酸交联硫辛酸-细胞内化肽6纳米粒（LC）或硬脂酰多肽聚合物（SHRss）或聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）纳米粒或二氧化硅、介孔二氧化硅纳米粒（MSN）或黑磷（P）或石墨烯量子点聚合物（GODss）或肽修饰的多壁碳纳米管（MHR）的任意一种。

6.按权利要求5所述的基于间充质干细胞的融合癌细胞膜仿生纳米粒的制备方法，其特征在于，其包括步骤：

（1）制备硫辛酸纳米粒LA-NP：硫辛酸（LA）与半胱氨酸（Cys）溶于甲醇，室温搅拌交联，氮气吹干甲醇，加二氯甲烷溶解，同时加入1%的胆酸钠溶液，超声乳化，加入双蒸水，搅拌离心后，用W超滤管离心，得到纯化的LA-NP；

（2）制备LACLss胶束：利用固相合成法合成LACL多肽,LACL与过量的半胱氨酸于甲醇中搅拌交联，氮气吹干甲醇，LACLss溶于双蒸水中，自组装形成LACLss胶束；

（3）制备LC纳米粒：将LA-NP与LACLss混合，共孵育自组装得LC纳米粒；

（4）制备硬脂酰多肽聚合物SHRss：利用固相合成法合成硬脂酰多肽；所述SHR用双蒸水配置成溶液，加入L-半胱氨酸盐酸盐，调节pH为7.0，搅拌下滴入过氧化氢，室温避光反应并利用透析袋在蒸馏水中透析，收集冻干得SHRss；

（5）制备PLGA纳米粒：利用超声乳化法制备PLGA纳米粒， PLGA溶于二氯甲烷中，加入到PVA 124溶液中，超声乳化，室温搅拌过夜，离心，收集PLGA纳米粒沉淀，双蒸水重悬即得PLGA纳米粒；

（6）二氧化硅和单分散介孔二氧化硅纳米球-星型MSN，溶于双蒸水即得二氧化硅纳米粒溶液和MSN纳米粒溶液；

（7）制备黑磷（P）纳米粒P-NP：取黑磷粉末溶于双蒸水中，超声，即得P-NP溶液；

（8）制备石墨烯量子点聚合物（GODss）：胺基封端的石墨烯量子点（GOD）溶液与还原敏感氨基交联剂3’,3’-二硫代双（磺酸琥珀酰亚胺基丙酸酯）（DTSSP）混合，交联搅拌过夜，并用透析袋在蒸馏水中透析后，收集冻干得GODss；

（9）制备肽修饰的多壁碳纳米管（MHR）：H3R6多肽由固相合成法合成；取多壁碳纳米管（MWCNTs），同时加入68% 的硝酸，搅拌回流，冷却至室温后以蒸馏水稀释抽滤烘干；称取纯化的MWCNTs投入浓硫酸/浓硝酸混酸中，水浴锅中反应，离心去除反应液，冻干得羧基化的MWCNT-COOH；称取MWCNT-COOH至含1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（EDC）和N-NPs羟基丁二酰亚胺（NHS）的双蒸水中，室温搅拌，按MCWNT-COOH与H3R6质量比为1:30投料，室温搅拌，离心1去除反应液，冻干得MHR。