[发明专利]基于玻璃纳米电极的单细胞糖基新陈代谢标记方法有效
| 申请号： | 201910822758.6 | 申请日： | 2019-09-02 |
| 公开（公告）号： | CN110514634B | 公开（公告）日： | 2021-09-21 |
| 发明（设计）人： | 钱若灿;周泽蕊;汪肖原 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海三和万国知识产权代理事务所(普通合伙) 31230 | 代理人： | 任艳霞 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 玻璃 纳米 电极 单细胞 新陈代谢 标记 方法 | ||
1.基于玻璃纳米电极的单细胞糖基新陈代谢标记方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)采用离心方法将含叠氮基或炔基的糖注入玻璃纳米管；
(2)纳米管中有一个电极作为工作电极插入充满细胞的溶液中，另一个电极作为参比电极浸入培养基中，工作电极选定细胞后使用倒置显微镜通过微操对纳米管进行调整至纳米管尖端插入细胞，通过成像系统对于这一过程进行观察，并施加200-800mV的直流电压，通电2-8min将所述含叠氮基或炔基的糖注入细胞质内；
(3)将步骤(2)选定的细胞放回培养箱中继续孵育6-15h使所述含叠氮基或炔基的糖在细胞表面表达后，加入带有炔基或叠氮基的荧光染料继续孵育30-40min，使带有炔基的荧光染料与细胞表面含叠氮基的糖结合，或者带有叠氮基的荧光染料与细胞表面含炔基的糖结合，随后用细胞培养液冲洗，使用荧光成像技术对于单细胞进行原位标记成像。
2.根据权利要求1所述的基于玻璃纳米电极的单细胞糖基新陈代谢标记方法，其特征在于，所述纳米管的孔径为50-100nm。
3.根据权利要求1所述的基于玻璃纳米电极的单细胞糖基新陈代谢标记方法，其特征在于，离心时的参数为3000rpm，3min。
4.根据权利要求1所述的基于玻璃纳米电极的单细胞糖基新陈代谢标记方法，其特征在于，步骤(2)施加400mV的直流电压，通电5min将所述含叠氮基或炔基的糖注入细胞质内。
5.根据权利要求1所述的基于玻璃纳米电极的单细胞糖基新陈代谢标记方法，其特征在于，所述含叠氮基或炔基的糖是指含叠氮基或炔基的甘露糖、岩藻糖或葡萄糖。
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