[发明专利]一种茶树菇纤溶酶及其制备方法

说明书

本发明提供了一种茶树菇纤溶酶及其制备方法，涉及生物工程技术领域，所述茶树菇纤溶酶由两个亚基A和B组成，亚基A的分子量为31.4kDa；亚基B的分子量为21.2kDa；亚基A的N端的十二个氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；亚基B的N端的十二个氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明提供的纤溶酶最适作用温度为47℃；在人体生理pH时能保存较好的活性，不同浓度Fe²⁺对茶树菇纤溶酶表现出明显的抑制作用；具有良好的溶栓性能，使用上安全性好，制作成本低廉，为在制备溶栓药物和/或功能食品中的应用提供了一定的研究基础，也为茶树菇的综合利用提供了一个新途径。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种茶树菇纤溶酶及其制备方法。

背景技术

血栓类疾病严重威胁着人类的生命与健康，其致残率和致死率逐年升高，是导致当今人类死亡的主要原因之一。溶栓法是目前治疗和预防血栓性疾病的主要手段，目前应用于临床治疗的溶栓药物疗效肯定，但还存在许多缺陷，且价格昂贵。因此，研制高效、快速、防止再栓塞且降低副作用的新型溶栓药物是现代医学的迫切需要，从自然界各种生物资源中开发新型溶栓物质是溶栓剂产品开发的重要途径。

茶树菇(Agrocybe aegerita)属担子菌门，伞菌纲，伞菌亚纲，伞菌目，球盖菇科，田头菇属真菌，又名柱状田头菇、杨树菇、茶薪菇等。茶树菇富含人体所需的氨基酸和微量元素，并含有抗癌活性的多糖。茶树菇味道鲜美，有滋阳壮阴、美容养颜的功效，对肾虚、水肿、风湿等有独特疗效，对抗癌、抗氧化、降压降脂等有较理想的治疗功能，是传统的药食同源真菌，具有重要的医用价值，是一种亟待开发的重要资源。

近十余年时间，本申请人团队一直致力于微生物源纤溶酶的制备、分离纯化及其功能性研究，突破性的从蛹虫草和好食脉孢菌中分离出4种新纤溶酶，授权了相关发明专利4项，其授权号分别为ZL201510159992.7、ZL201010204473.5、ZL200910072630.9、ZL200810137564.4。这4种纤溶酶均是通过真菌发酵方式制得的，真菌发酵代谢产物较多，导致纤溶酶的后续分离纯化的步骤较多，过多的分离纯化步骤会降低纤溶酶的活力，导致纤溶效果下降，近年来申请人一直在努力寻找成分不复杂的新来源纤溶酶，易于后续的分离纯化。申请人团队通过筛选发现大多数食用菌中均含有纤溶酶，其中以茶树菇中纤溶酶含量较高，达2780.05±34.32U/g(以干重计)，值得注意的是，国内外相关研究中还未有关于从茶树菇中提取纤溶酶的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种茶树菇纤溶酶及其制备方法。本发明提供的茶树菇纤溶酶最适作用温度为47℃；在人体生理pH时能保存较好的活性，不仅具备良好的溶栓效果、而且使用上安全性好，易于人体吸收、制作成本低廉，具有开发应用的前景。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种茶树菇纤溶酶，所述茶树菇纤溶酶由两个亚基A和B组成，所述亚基A的分子量为31.4kDa；所述亚基B的分子量为21.2kDa；所述亚基A的N端的十二个氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述亚基B的N端的十二个氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明还提供上述技术方案所述的茶树菇纤溶酶的制备方法，包括：用生理盐水浸提茶树菇子实体，得到浸提液；将所述浸提液进行固液分离，得到的粗酶液依次进行盐析、凝胶色谱、弱阳离子交换色谱、疏水相互作用色谱和强阳离子交换色谱分离，得到茶树菇纤溶酶。

优选地，所述茶树菇子实体的质量与生理盐水的体积比为1kg:(8～12)L。

优选地，所述浸提的条件包括：浸提的时间为5～7h，浸提的温度为3～5℃。

优选地，所述凝胶色谱柱分离条件包括：洗脱液为0.01～0.03mol/L PBS缓冲溶液，流速为4～6mL/min；所述洗脱液的pH值为6.0。