[发明专利]一种茶树菇纤溶酶及其制备方法有效
| 申请号： | 201910822101.X | 申请日： | 2019-09-02 |
| 公开（公告）号： | CN110423739B | 公开（公告）日： | 2020-10-20 |
| 发明（设计）人： | 刘晓兰;李冠龙;郑喜群;邓永平 | 申请（专利权）人： | 齐齐哈尔大学 |
| 主分类号： | C12N9/58 | 分类号： | C12N9/58 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理事务所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 张雪 |
| 地址： | 161006 黑*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 茶树 菇纤溶酶 及其 制备 方法 | ||
1.一种茶树菇纤溶酶，其特征在于，所述茶树菇纤溶酶由两个亚基A和B组成，所述亚基A的分子量为31.4kDa；所述亚基B的分子量为21.2kDa；所述亚基A的N端的十二个氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述亚基B的N端的十二个氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；
所述的茶树菇纤溶酶的制备方法为：用生理盐水浸提茶树菇子实体，得到浸提液；将所述浸提液进行固液分离，得到的粗酶液依次进行盐析、凝胶色谱、弱阳离子交换色谱、疏水相互作用色谱和强阳离子交换色谱分离，得到茶树菇纤溶酶；
茶树菇子实体的质量与生理盐水的体积比为1kg:10L；
所述浸提的条件包括：浸提的时间为6h，浸提的温度为4℃；
所述凝胶色谱柱分离条件包括：洗脱液为0.02mol/L PBS缓冲溶液，流速为6mL/min；所述洗脱液的pH值为6.0；
所述弱阳离子交换色谱分离采用线性洗脱，起始缓冲溶液为0.02mol/L PBS缓冲溶液，洗脱液为含有0.8mol/L NaCl的0.02mol/L PBS缓冲溶液；所述缓冲溶液的pH值独立的为6.0；流速独立的为2mL/min；
所述疏水相互作用色谱分离采用线性洗脱，起始缓冲溶液为0.02mol/L PBS缓冲溶液，洗脱液为含有硫酸铵饱和度10％的0.02mol/L PBS缓冲溶液；所述缓冲溶液的pH值独立的为7.4；
所述强阳离子交换色谱分离采用线性洗脱，起始缓冲溶液为0.02mol/L PBS缓冲溶液，洗脱液为含有0.8mol/L NaCl的0.02mol/L PBS缓冲溶液；所述洗脱液的pH值独立的为5.5。
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