[发明专利]一种用于分析CD1c+树突状细胞亚群表型和功能的组合配方试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种用于分析CD1c+树突状细胞亚群表型和功能的组合配方试剂盒及其应用，所述试剂盒检测对象包括CD1c、CD40、IL‑6和IL‑10。本发明的检测试剂盒可用于高效快速地鉴别外周血中CD1c⁺树突状细胞亚群表型同时分析其功能，保证准确率的同时降低因检测大量表面抗原分子导致的经济成本，且检测方法简单易行。

技术领域

本发明属于生物技术领域，用流式细胞光度术进行免疫检测分析人外周血树突状细胞，具体是涉及一种用于分析CD1c+树突状细胞亚群表型和功能的组合配方试剂盒及其应用。

背景技术

流式细胞仪分析技术已做为免疫学主要技术而用于临床和科研工作。树突状细胞做为人体内免疫系统起主要调控作用的细胞是免疫学研究热点之一。目前树突状细胞的检测主要依靠流式细胞仪分析技术，但目前测定树突状细胞的流式细胞仪分析方案多种多样，没有一个统一标准化的模式。这主要是由于树突状细胞的研究日新月异，发展一日千里，多个不同的树突状细胞亚型已被报导发现，目前针对树突状细胞的流式细胞仪分析方案未免粗放，已不能满足目前临床针对不同亚型的树突状细胞的精确分析要求。

流式细胞仪(Flow cytometry)是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标。流式细胞仪主要由四部分组成。它们是：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。

流式细胞仪可同时进行多参数测量，信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的，所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞通过测量区时，受到激光照射会向立体角为2π的整个空间散射光线，散射光的波长和入射光的波长相同。散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关，因为这些生物学参数又和细胞对光线的反射、折射等光学特性有关。未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射，因此可利用不同的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选。经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变，其散射光信号当然不同于活细胞。散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数相关，还跟散射角、及收集散射光线的立体角等非生物因素有关。

在流式细胞光度术测量中，常用的是两种散射方向的散射光测量：①前向角(即0角)散射(FSC)；②侧向散射(SSC)，又称90角散射。这时所说的角度指的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向之间大致所成的角度。一般说来，前向角散射光的强度与细胞的大小有关，对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大；对球形活细胞经实验表明在小立体角范围内基本上和截面积大小成线性关系；对于形状复杂具有取向性的细胞则可能差异很大，尤其需要注意。侧向散射光的测量主要用来获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的有关信息。侧向散射光虽然也与细胞的形状和大小有关，但它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感，也能对细胞质内较大颗粒给出灵敏反映。

在实际使用中，仪器首先要对光散射信号进行测量。当光散射分析与荧光探针联合使用时，可鉴别出样品中被染色和未被染色细胞。光散射测量最有效的用途是从非均一的群体中鉴别出某些亚群。

荧光信号主要包括两部分：①自发荧光，即不经荧光染色，细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光；②特征荧光，即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光，其荧光强度较弱，波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中，对于结合水平不高的荧光抗体来说，如何提高信噪比是个关键。一般说来，细胞成分中能够产生的自发荧光的分子(例核黄素、细胞色素等)的含量越高，自发荧光越强；培养细胞中死细胞/活细胞比例越高，自发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的比例越高，自发荧光越强。