[发明专利]一种用于分析CD1c+树突状细胞亚群表型和功能的组合配方试剂盒及其应用有效
申请号: | 201910818357.3 | 申请日: | 2019-08-30 |
公开(公告)号: | CN110389221B | 公开(公告)日: | 2021-03-16 |
发明(设计)人: | 周放;陈小平;秦莉;古艳丽;许文龙;卢永;常旭;韦国建;容志恩 | 申请(专利权)人: | 广州中科蓝华生物科技有限公司 |
主分类号: | G01N33/533 | 分类号: | G01N33/533;G01N33/574 |
代理公司: | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人: | 巩克栋 |
地址: | 510530 广东省广州市高新技术产业开发*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 分析 cd1c 树突 细胞 表型 功能 组合 配方 试剂盒 及其 应用 | ||
1.CD1c、CD40、IL-6和IL-10的抗体在制备用于非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群功能分析的试剂盒中的应用,其特征在于,所述抗体由四种不同的荧光色素标记;
所述荧光色素标记选自FITC、PE-Cy7、PerCP-Cy5.5、Amcyan、APC-Cy7或Q-Dot;
所述非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群功能分析包括:
通过CD1c的表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群表型的比例,
通过CD40分子的表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群的分化成熟状况,
通过IL-6的分泌表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群介导的免疫功能低下,以及
通过IL-10的分泌表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群的免疫抑制功能。
2.根据权利要求1所述的应用,其中,采用所述试剂盒进行检测时,包括如下步骤:
(1)外周血的预处理,分离出树突状细胞,加入白细胞刺激因子孵育;
(2)将步骤(1)得到的血细胞染色,然后加入不同荧光色素标记的CD40和CD1c抗体进行首次孵育,再次染色,然后将得到的树突状细胞用福尔马林溶液固定,再次孵育备用;
(3)将步骤(2)所得细胞重悬于细胞穿透液,离心弃上清,将沉淀的细胞重悬于细胞穿透液,加入不同荧光色素标记的IL-6和IL-10抗体孵育;
(4)将步骤(3)孵育好的细胞重悬于细胞穿透液,离心去上清,将沉淀细胞重悬于细胞染色液,用流式细胞仪进行分析检测。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,步骤(1)所述外周血的体积为10-100μL;
所述白细胞刺激因子的体积浓度为0.1%-0.3%。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(1)所述孵育的时间为4-6h。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,步骤(1)所述孵育的温度为37-40℃。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,步骤(2)所述首次孵育的条件为室温下30-60min。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,步骤(2)所述福尔马林溶液的质量分数为2-4%。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,步骤(2)所述再次孵育的条件为室温避光条件下15-20min。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,步骤(3)所述孵育的条件为4℃避光条件下12-24h。
10.根据权利要求2-9任一项所述的应用,其特征在于,采用所述试剂盒进行检测时,包括如下步骤:
(1)取10-100μL外周血抗凝处理,外周血全血混合1×红细胞裂解液中,旋转震荡10s后,室温避光静置15min,350g离心5min,弃上清,将沉淀细胞重悬于细胞染色液,按照0.08-0.1%体积浓度的比例加入白细胞刺激因子37℃孵育4-6h;
(2)将步骤(1)得到的血细胞染色,然后加入不同荧光色素标记的CD40和CD1c抗体进行室温孵育25-35min,再次染色,然后将得到的树突状细胞用2%的福尔马林溶液固定,室温避光孵育15min备用;
(3)将步骤(2)所得细胞重悬于细胞穿透液,离心弃上清,将沉淀的细胞重悬于细胞穿透液,加入不同荧光色素标记的IL-6和IL-10抗体,在4℃避光条件下孵育12h;
(4)将步骤(3)孵育好的细胞重悬于细胞穿透液,离心去上清,将沉淀细胞重悬于细胞染色液,用流式细胞仪进行分析检测,通过CD1c的表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群表型的比例,通过CD40分子的表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群的分化成熟状况,通过IL-6的分泌表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群介导的免疫功能低下,以及通过IL-10的分泌表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群的免疫抑制功能。
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