[发明专利]一种用于分析CD1c+树突状细胞亚群表型和功能的组合配方试剂盒及其应用

权利要求书

1.CD1c、CD40、IL-6和IL-10的抗体在制备用于非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群功能分析的试剂盒中的应用，其特征在于，所述抗体由四种不同的荧光色素标记；

所述荧光色素标记选自FITC、PE-Cy7、PerCP-Cy5.5、Amcyan、APC-Cy7或Q-Dot；

所述非小细胞肺癌病人外周血CD1c+树突状细胞亚群功能分析包括：

通过CD1c的表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c⁺树突状细胞亚群表型的比例，

通过CD40分子的表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c⁺树突状细胞亚群的分化成熟状况，

通过IL-6的分泌表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c⁺树突状细胞亚群介导的免疫功能低下，以及

通过IL-10的分泌表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c⁺树突状细胞亚群的免疫抑制功能。

2.根据权利要求1所述的应用，其中，采用所述试剂盒进行检测时，包括如下步骤：

(1)外周血的预处理，分离出树突状细胞，加入白细胞刺激因子孵育；

(2)将步骤(1)得到的血细胞染色，然后加入不同荧光色素标记的CD40和CD1c抗体进行首次孵育，再次染色，然后将得到的树突状细胞用福尔马林溶液固定，再次孵育备用；

(3)将步骤(2)所得细胞重悬于细胞穿透液，离心弃上清，将沉淀的细胞重悬于细胞穿透液，加入不同荧光色素标记的IL-6和IL-10抗体孵育；

(4)将步骤(3)孵育好的细胞重悬于细胞穿透液，离心去上清，将沉淀细胞重悬于细胞染色液，用流式细胞仪进行分析检测。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(1)所述外周血的体积为10-100μL；

所述白细胞刺激因子的体积浓度为0.1％-0.3％。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(1)所述孵育的时间为4-6h。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(1)所述孵育的温度为37-40℃。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，步骤(2)所述首次孵育的条件为室温下30-60min。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤(2)所述福尔马林溶液的质量分数为2-4％。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤(2)所述再次孵育的条件为室温避光条件下15-20min。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤(3)所述孵育的条件为4℃避光条件下12-24h。

10.根据权利要求2-9任一项所述的应用，其特征在于，采用所述试剂盒进行检测时，包括如下步骤：

(1)取10-100μL外周血抗凝处理，外周血全血混合1×红细胞裂解液中，旋转震荡10s后，室温避光静置15min，350g离心5min，弃上清，将沉淀细胞重悬于细胞染色液，按照0.08-0.1％体积浓度的比例加入白细胞刺激因子37℃孵育4-6h；

(2)将步骤(1)得到的血细胞染色，然后加入不同荧光色素标记的CD40和CD1c抗体进行室温孵育25-35min，再次染色，然后将得到的树突状细胞用2％的福尔马林溶液固定，室温避光孵育15min备用；

(3)将步骤(2)所得细胞重悬于细胞穿透液，离心弃上清，将沉淀的细胞重悬于细胞穿透液，加入不同荧光色素标记的IL-6和IL-10抗体，在4℃避光条件下孵育12h；

(4)将步骤(3)孵育好的细胞重悬于细胞穿透液，离心去上清，将沉淀细胞重悬于细胞染色液，用流式细胞仪进行分析检测，通过CD1c的表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c⁺树突状细胞亚群表型的比例，通过CD40分子的表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c⁺树突状细胞亚群的分化成熟状况，通过IL-6的分泌表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c⁺树突状细胞亚群介导的免疫功能低下，以及通过IL-10的分泌表达情况分析非小细胞肺癌病人外周血CD1c⁺树突状细胞亚群的免疫抑制功能。