[发明专利]一种稳定、灵敏的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒在审
申请号: | 201910817182.4 | 申请日: | 2019-08-30 |
公开(公告)号: | CN110514826A | 公开(公告)日: | 2019-11-29 |
发明(设计)人: | 李静;史建国;包兴艳;李志明;胡晓飞;甘宜梧;董雯 | 申请(专利权)人: | 山东博科生物产业有限公司 |
主分类号: | G01N33/543 | 分类号: | G01N33/543;G01N33/531 |
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地址: | 250299 山东省济南市章丘区明水*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 表面活性剂 防腐剂组成 检测试剂 胶乳颗粒 抗原包被 瓜氨酸 缓冲液 抗环瓜氨酸肽抗体 复合 生物技术领域 无机盐离子 羧基胶乳 灵敏度 粒径 联用 微球 灵敏 | ||
本发明公开了一种稳定、灵敏的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒,涉及生物技术领域。所述检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2,其中:所述试剂R1由复合缓冲液、无机盐离子、PEG8000、表面活性剂和防腐剂组成;所述试剂R2由复合缓冲液、环瓜氨酸抗原包被胶乳颗粒、表面活性剂和防腐剂组成,环瓜氨酸抗原包被胶乳颗粒采用72nm、126nm、280nm三种不同粒径的羧基胶乳微球联用。本发明能够进一步提高灵敏度和稳定性,并且线性范围宽。
技术领域
本发明涉及临床体外检测技术领域,具体涉及一种稳定、灵敏的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒。
背景技术
抗环瓜氨酸肽抗体(Anti-CCP)是环状聚丝蛋白的多肽片对心肌损伤的诊断有显著的特异性片段,是以IgG型为主的抗体,对类风湿性关节炎(RA)具有很好的敏感性和特异性,且抗CCP抗体阳性的RA病人骨破坏较抗CCP抗体阴性者严重。有学者认为抗CCP抗体对RA诊断敏感性为50%~78%,特异性为96%,早期患者阳性率可达80%。此外,抗CCP抗体不仅是RA早期诊断诊断指标,还是鉴别侵袭性和非侵袭性RA的灵敏指标,其抗体阳性患者比抗体阴性的患者易发展更严重的关节骨质破坏。因此,抗环瓜氨酸多肽抗体的检测对与RA的诊断具有重要意义。
目前,测定抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体常用的方法有放射免疫学分析法、ELISA法、免疫比浊法等。其中,放射免疫学分析法检测耗时长,而且有放射性元素的污染,其使用受到限制;ELISA法操作繁琐,灵敏度低,检测结果多为定性;免疫比浊法操作简单、使用方便,但现有的免疫比浊法检测试剂盒存在灵敏度和稳定性较差,线性范围比较窄的缺点。
发明内容
本发明提供一种能够进一步提高灵敏度和稳定性,并且线性范围宽的稳定、灵敏的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒。
为解决上述技术问题,本发明提供技术方案如下:
本发明提供一种稳定、灵敏的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2,其中:
所述试剂R1的成分和含量如下:
所述试剂R2的成分和含量如下:
所述环瓜氨酸抗原包被胶乳颗粒的制备方法如下:
步骤1:将72nm羧基胶乳颗粒、126nm羧基胶乳颗粒、280nm羧基胶乳颗粒按体积比为3:2:1的比例进行混匀;
步骤2:向步骤1得到的溶液中加入AMPD缓冲液,振荡混匀,然后20000rpm离心65min,弃上清;之后再次加入AMPD缓冲液,进行超声重悬;
步骤3:向步骤2得到的溶液中加入EDC溶液,在20℃温度下振荡反应45分钟;
步骤4:向步骤3得到的溶液中加入环瓜氨酸抗原,混匀,在30℃温度下振荡反应5小时;
步骤5:向步骤4得到的溶液中加入封闭剂,在25℃温度下封闭24小时。
步骤6:对步骤5得到的溶液进行20000rpm离心60min,弃上清,然后加入缓冲液,进行超声重悬5分钟,再次20000rpm离心60min,去除上清,所得沉淀即为环瓜氨酸抗原包被胶乳颗粒。
进一步的,所述缓冲液为25℃,pH为7.8-8.2的CAPSO-ADA复合缓冲液。
进一步的,所述表面活性剂的成分和含量如下:
月桂基羧甲基钠型味唑啉乙酸盐 15g/L
芥酸酰胺丙基甜菜碱 10g/L
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